siRNA转染细胞敲除效率不稳定
2021-08-05
问题描述：
大家好，近期在用lipo2000做悬浮细胞HL-60的siRNA转染，siRNA是由公司合成的三个siRNA，但是敲除效率很低，并且每次qPCR后做出来的结果都不一样：有时是第一个siRNA敲除作用好点，但有时是第二个或第三个siRNA效果好。由于结果不稳，并且细胞不好转我就将细胞换成了A549，但是换成了贴壁细胞后发现每次转染后进行qPCR检测时结果还是不稳，另外，我还设置了不同siRNA的组合，有时结果显示siRNA1+siRNA3效果好，但有时显示siRNA1+2+3效果好。光做这个siRNA转染已经几个月了，到现在都没有确定具体哪个片段起作用或效果最好，也没有一个稳定的趋势。请问造成这种敲除效率不稳定的原因到底是为什么？急切等待回复，谢谢！
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Fubio-GG
用户
沉默效率不稳定，一是跟你的转染效率有关，而是跟你的siRNA序列有效性有关
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晨光微曦
用户你转染的lipo：siRNA的比例是多少？另外转染方法是否正确？
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dxy_31w5roj3
用户更多是实验体系：包括细胞、转染等关系密切，当然也包括时间点。
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dxy_aceo4212
用户国内用的lipo2000多，就是听说敲除效率不稳定，可以试试其他的牌子，听说隔壁实验室用的是RFect
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dxy_aceo4212
用户可以试试别的品牌的试剂，听说life和RFect挺不错的
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