DAPI Staining 实验方法
我是96孔板贴壁细胞做的,吸尽培养基后加PBS洗3次,每次5分钟。
加-20℃无水乙醇后4℃放30min固定,PBS洗3次,每次5分钟。
加DAPI染液20μL,避光2min。
吸除染液,PBS洗3次,每次5分钟,荧光显微镜观察。
以上是我的实验步骤,我觉得拍出来的不够清晰,而且细胞周围看起来很糊,但不知道是什么原因,请各位老师,师兄师姐帮我分析下,谢谢你们。我试过加染液30μL、染色5min(染液是碧云天的,直接用),但拍出来的效果还没现在好。
拍摄-1762.jpg
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引用回帖:2楼: Originally posted by daibingling at 2014-05-12 11:21:12
我觉得你的背景还是很蓝,dapi染完以后可以充分的洗,多洗几次,就会好很多
嗯,我正准备用PBS多洗几次。
引用回帖:5楼: Originally posted by schorr at 2014-05-13 09:40:44
确定是显微镜目镜和CCD采集不同步的问题
要在目镜下看清楚后再在屏幕上看着进行微调
清晰后再采集图片
可避免你照片发虚的问题
我在视野里观察的时候,细胞本身就很模糊,拍照预览的时候是微调到最佳效果的。“目镜和CCD采集不同步”这个我不懂了,求教
,
引用回帖:4楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-05-13 09:25:35
染色没问题,照相聚焦不对
我让老师看了图片,也说是聚焦不对,可我是调到最好状态时再拍的,还是模糊。
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发布于 : 2021-08-27
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