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CN107385014A_一种直接定量检测循环miRNA的RT‑qPCR方法在审

专利基本信息
申请号 CN201710442989.5 申请日 2017-06-13
公开(公告)号 CN107385014A 公开(公告)日 2017-11-24
申请公布号 CN107385014A 申请公布日 2017-11-24
分类号 C12Q1/68(2006.01)I 分类 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
发明人 苟德明;牛燕琴;康康 申请(专利权)人
代理机构 广州番禺容大专利代理事务所(普通合伙) 代理人 刘新年
地址 518060 广东省深圳市南山区南海大道3688号粤海门广场A207
摘要 本发明涉及生物医学领域,具体涉及一种不需提取核酸,直接检测血清或血浆中循环microRNA(miRNA)的实时荧光定量RT‑qPCR方法。所述方法包括:S1:裂解血清或血浆中的外泌体及miRNA蛋白复合体,离心后得到循环miRNA粗提物;S2:miRNA加尾及逆转录;S3:RT‑qPCR定量检测。本发明miRNA直接荧光定量RT‑qPCR扩增方法[Direct S‑Poly(T)Plus,简称DSPP]中,不需要提取核酸,且miRNA的Poly(A)加尾和逆转录将在一个反应体系中同步完成,操作简便,缩短时间,可在95分钟内完成cDNA的制备。该技术体系灵敏度与stem‑loop方法相比提高数十甚至上百倍,建立了一种非常简便、灵敏、高效、快捷、廉价的miRNA检测的技术体系。该技术体系尤其适合于临床应用推广及其从miRNA丰度较低的生物体液样本中检测miRNA。
一种直接定量检测循环miRNA的RT‑qPCR方法

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