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细胞原代培养实验_实验⽅法_

来自 : mayitao

货号：	MXC230
供应商：	上海美轩生物
规格：	25cm2

人乳腺癌阿霉素耐药细胞株请收到细胞后，在倒置镜下(最好是在4X物镜)观察整个细胞生长情况。（一）如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸出培养液，换10ml新鲜培养液后继续培养。(二)如果细胞已长满，即可进行传代培养。具体步骤如下：1.弃去培养液，用PBS（不含钙,镁离子）洗1-2次。2.加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA）于培养瓶中，倒放于37℃培养箱1-3分钟预热，之后翻转培养瓶10-30秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量完全培养基终止消化。3.按6-8ml/瓶补加完全培养基，轻轻打匀后吸出一半，分到新的培养瓶中。如果没有特别说明，收到细胞后的第一次传代一般是一传二。注：1、观察细胞最好在低倍镜（4或5X物镜)下进行，否则不能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X或20X物镜下。2、瓶中运输培养基不能重复再用,请换用加双抗的新培养基，细胞冻存后,培养基中可不加任何抗生素。3、有些细胞贴壁不牢，如发现贴壁细胞有脱落，可离心吹打后接种到新瓶内。4、收到细胞后，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请及时与我们联系。

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发布于： 2021-08-18 阅读（476）

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