Description
ProductAvailABIlity:InStock(deliverywithin2-3businessdays,noextrachargefordrop-shipping).
Ordering:ToplaceanorderviacreditcardorPOuseAddtoCartbutton(creatinganaccountisnotrequired).
TransfectionReagentforHepG2Cells(HepatocellularCarcinomaCells,HB-8065)
- Proprietarycationiclipidsformulation
- HightransfectionefficiencyofsmallRNA(siRNA,shRNA,miRNA),mRNA,pDNA
- Effectiveandrobustintracellulardelivery
- KitincludesTransfectionEnhancerreagent
- Producesconsistentresults,lot-to-lot,plate-to-plate,andwell-to-well
- Work inthepresenceofserum
- Aprovenreagentforestablishingstablecelllines
- Optimizedtransfectionprotocolsareadaptedforusewithbothstandard&reversetransfectionmethods
- DownloadinvitroHepG2 transfectionprotocol:[PDF]
- Download HepG2CRISPR/Cas9transfectionprotocol:[PDF]
- DownloadPowerPointpresentationforHepG2cellstransfectionkit:[PPT]
- DevelopedandmanufacturedbyAltogenBiosystems
TransfectionEfficiency:
Reagentexhibitsatleast90%transfectionefficiencyofsiRNAdelivery.TransfectionefficiencywasdeterminedbyqRT-PCR.
TransfectionProtocolandMSDS:
DownloadAltogenBiosystemsHepG2TransfectionProtocol:[PDF]
DownloadMSDS:[PDF]
HepG2CellLine:
Livercancerishighlyaggressiveanddevastatingdiseasethatfeaturesseveralmaincharacteristics,includingahighrateofrecurrence,lowearlydetectionrateandineffectivetreatmentapproaches.Inadditiontobeingthefifthcommonmalignancy,itisconsideredthesecondprimarycauseofcancer-relatedmortalitiesworldwide,asstatedbyOncotarget,publishedinJuly2015.TheHepG2hepatomacelllineisimportantforthetoxicologicalassessmentofnovelcombinatorialdrugs.HepG2wasderivedfromthelivertissueofa15-year-oldmalewithdifferentiatedhepatocellularcarcinoma.Thesecellsareepithelialandhaveamodelchromosomenumberof55.HepG2cellssecreteavarietyofmajorplasmaproteins,includingalbumin,transferrin,alpha1-antitrypsin,alpha2-macroglobulin,andplasminogen(theyhavebeengrownsuccessfullyinlarge-scalecultivationsystems).Thecellsareresponsivetostimulationwithhumangrowthhormone.HepG2cellshavealsobeenshowntoberesistanttoG418.HepG2cellsandtheirderivativesareusedasamodelsystemforstudiesoflivermetabolismandtoxicityofxenobiotics,antigenotoxicandcogenotoxicagents,understandinghepatocarcinogenesis,thedetectionofcytoprotective,andfordrugtargetingstudies.Also,HepG2cellsarecommonlyemployedintrialswithbio-artificialliverdevices.Thiscelllineiswidelyusedinhumancancerresearchoftheliverandisessentialformanydifferenttypesofbiomedicalresearch.AltogenBiosystemsoffershighlyefficienttransfectionreagentkitsfortheHepG2hepatomacellline.
Data:
Figure1.GAPDmRNAlevelswerequantifiedusingreal-timeRT-PCRintheHepG2cellstransfectedwithsiRNAstargetingGAPDornon-silencingsiRNA.Forty-eighthourspost-transfection,thecellswereharvestedandanalyzedbyreal-timeRT-PCRforGAPDHmRNAexpressionlevels.Datawerenormalizedagainstthe18SrRNAsignal.Controlsampleswereeithermock-transfectedoruntreated.Valuesarenormalizedtountreatedsample.Dataaremeans±SD(n=3).
Figure2.ProteinexpressionofGAPDHinHepG2cells.DNAplasmidexpressingGAPDHorsiRNAtargetingGAPDHweretransfectedintoHepG2cellsfollowingAltogenBiosystemstransfectionprotocol.At72hourspost-transfectionthecellswereanalyzedbyWesternBlotforproteinexpressionlevels(normalizedbytotalprotein,10µgoftotalproteinloadedpereachwell).Untreatedcellsusedasanegativecontrol.
SelectedHepG2transfectionreagentproductcitations:
- JournalofMolecularEndocrinology2010.Identificationofproteinkinasesthatcontrolovarianhormone release…Sirotkinetal[PDF]
- FEBSLetters2009(583).MicroRNA125aanditsregulationofthep53tumorsuppressorgene…Zhangetal[PDF]
- CellularPhysiology2011.IdentificationofMicroRNAsControllingHumanOvarianCellProliferation …Sirotkinetal [PDF]
Selected invivo transfectionproductcitations(ALTOGEN® INVIVO TransfectionKits usedinthefollowingpublications):
- 2008454(7203):523-7.Innateimmunityinducedbycomposition-dependentRIG-I…Saitoetal[PDF]
- Am JPathology.2010177(4):1870-80.RoleofocularcomplementfactorHinamurinemodel…Lyzogubovetal[PDF]
- NatureBiotechnology.201129(4):341-5.DeliveryofsiRNAtothemousebrainby…Alvarez-Ervitietal [PDF]
- CancerResearch.201171(15):5144-53.InhibitionofmiR-193aexpressionby…Iliopoulosetal[PDF]
- 201016(11):2108-19.RNaseLreleasesasmallRNAfromHCVRNAthatrefolds…Malathietal[PDF]
- 201255(7):2069-79.Thep47phox-andNADPHoxidaseorganiser1…Younetal [PDF]
- BritishJournalofCancer.2012 107(3):516-26.TIGARinducesp53-mediatedcell-cycle…Madanetal[PDF]
- 201463(2):353-61.Tissuetransglutaminasecontributesto…Liuetal[PDF]
- Circulation Research.201015;107(8).Kruppel-likefactor-4transcriptionallyregulates…Cowanetal[PDF]
- 201259(1):158-66.Roleofuncoupledendothelialnitricoxidesynthase…Gaoetal[PDF]
- JounalofBIOLOGicalChemistry.2012287(4):2907.Chaperoningofmutantp53protein…Gognaetal [PDF]
- PLoSPathogens.20128(8)Uridinecompositionofthepoly-U/UCtractofHCVRNA…Schnelletal[PDF]
- JProteomeRes.2012(11) Retinalproteomeanalysisinamousemodelofoxygen-induced…Kimetal[PDF]
- 2011141(2) Differential typeIinterferon-mediatedautophagictrafficking…Desaietal[PDF]
- PLoSPathog.201410(10)ExosomesfromhepatitisCinfectedpatientstransmitHCV…Bukongetal[PDF]
HepG2TransfectionKit
AltogenBiosystems:
AltogenBiosystemsisalifesciencescompany thatmanufacturesover100celltypespecificandpre-optimizedtransfection kits, electroporationbuffers,andtargetedinvivo deliverykitsandreagents.Advancedformulationofreagentsandoptimizedtransfectionprotocolsprovidehighlyefficientintracellulardeliveryofbiomolecules(proteins,DNA,mRNA,shRNA andsiRNA,andsmallmoleculecompounds).Readmore abouttransfectiontechnologyatAltogen’s TransfectionResource.
AltogenLabsResearchServices:
AltogenLabsprovidesGLP-compliantcontractresearchstudiesforpre-clinicalresearch,INDapplications,anddrugdevelopment.BiologyCROservices include:Xenograftmodels(30+),developmentofstablecelllines,ELISAassaydevelopment,cell-basedandtissuetargetedRNAistudies,safetypharm/toxassays,andotherstudies(visitAltogenLabs.com).
VolumeOptions:
- 0.5ml(Catalog#2067)
- 1.5ml(Catalog#2068)
- 1.5mlCRISPR(Catalog#2154)
- 8.0ml(Catalog#2069)
AltogenBiosystems是一家开发和制造用于生命科学研究,药物发现和开发的转染试剂盒的生物技术公司。转染试剂盒针对特定癌细胞系和原代细胞培养进行了优化,可将生物分子有效递送到靶组织中。通过先进的试剂配方和优化的转染方案实现体外(癌细胞系)和体内(动物组织靶向试剂、癌细胞系)递送货物分子,包括质粒DNA,各种类型的RNA(mRNA,siRNA,shRNA,microRNA),蛋白质和小分子研究。
Altogen生命科学公司致力于研发,生产和销售特定细胞系的转染试剂,用于细胞间生物分子的传递,并通过对转染试剂类型的设计将siRNA和质粒DNA有效地转入不同的细胞系和原代细胞内。Altogen公司开发的聚合物,脂质体,纳米粒子为基础的转染技术分别针对分子生物学,组合化学,和细胞生物学而分别应用。Altogen定制服务提供符合GLP要求定制研究服务,包括代稳定的细胞系,细胞银行和冷冻保存,焦磷酸测序,克隆,RNA干扰(RNAi)和基因沉默服务,发展分析,siRNA文库筛选,并转染服务。稳定的肿瘤细胞株和原代细胞的产生,可以是非常昂贵和费时。该公司的细胞培养科学家的细胞株的选择,无论是利息或shRNA表达载体的稳定表达的基因改造。标准的RNAi技术服务,包括设计与合成的siRNA的利益,验证siRNA的沉默效率,siRNA转染条件的优化,使高效的基因沉默细胞系或原代培养细胞的靶基因。转染培养细胞的瞬时或稳定的引入外源性分子和遗传物质(即RNA或DNA),通常是在生物实验室用来研究基因功能,基因表达的调节,生化映射,突变分析,和蛋白质的生产。科学家利用各种载体分子,这种分子,使质粒DNA(PDNA),信使RNA(mRNA),短干扰RNA(siRNA),小分子RNA(miRNA)的,并进入肿瘤细胞株和原代细胞的蛋白质的基因交付。不幸的是,无单提货的方法或转染试剂,可以适用于所有类型的细胞,细胞的细胞毒性和转染效率显着不同,取决于试剂,协议,并正在利用细胞类型。Altogen生物系统公司提供超过60种类型的细胞的预优化转染试剂盒。纳米粒子,脂质和聚合物基ALTOGEN®在体内转染试剂,使交付功能的RNA和DNA分子在体内。PEG脂质体在体内输送系统减少由于PEG修饰的先天免疫反应,并提供高效的siRNA转染的DNA,并在体内的蛋白质。由科学“杂志(2010年12月17日):PEG脂质体在体内转染试剂盒siRNA的特色Altogen生物系统功能的特定细胞系转染试剂盒
120+细胞转染试剂和活体组织靶向试剂盒制造商AltogenBiosystems是一家生物技术公司,开发和制造用于生命科学研究、药物发现和开发的转染试剂盒。Altogen®体内转染试剂可有效地将生物分子导入靶组织。细胞转染试剂盒针对特定的癌细胞系和原代细胞进行了优化。通过先进的试剂配方和优化的转染方案实现货物分子(DNA、RNA、蛋白质)的高效传递。AltogenBiosystems利用高分子化学、分子和细胞生物学的专业知识,开发了新的体内外给药技术。转染是将外源分子导入培养细胞中,常用于研究基因功能、基因表达调控、生化定位和蛋白质生产。不幸的是,由于细胞毒性和转染效率的差异很大,并且取决于所使用的试剂、方案和细胞类型,因此没有一种单一的传递方法或转染试剂可应用于所有类型的细胞。AltogenBiosystems为120多个癌细胞系和原代细胞类型提供优化的转染试剂盒和电穿孔产品。体内转染试剂可实现组织靶向给药。Altogen的转染试剂盒包括用于体外(癌细胞系)和体内(用于动物研究的组织靶向试剂)转染的转染增强剂试剂和转染复合物冷凝器。Altogen实验室提供符合GLP的实验室合同研究服务。我们的生物CRO服务包括异种移植物的疗效、IND应用的pharm/tox研究和安全性测试、分析开发(ELISA、IC-50、qPCR)、90多个异种移植物动物模型、RNAi和基因沉默服务。Altogen的细胞培养科学家通过在28天内培育出稳定的细胞系,将选择的细胞系转化为稳定表达感兴趣的基因。
ebiomall.com
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
转染分2种,一种是瞬时转染,即转染后让细胞表达目的蛋白后即提取蛋白,提一次蛋白,转染一次,这种方式一般不传代;
另一种转染为稳定转染,转染后加入一定选择压力进行筛选,没有转染的细胞不能存活,只留下转染的细胞,这种情况下可以筛选单个转染细胞,构建稳定表达某一特定蛋白或基因的细胞系。
GFP发出绿色荧光的原理是Ca离子进入GFP的beta-barrel结构中引起的特定能级,因此只要这个结构仍然保持着,就可以发出荧光。
由于GFP的beta-barrel结构非常稳定,一些版本的GFP蛋白(如EGFP)甚至能抵抗94C的高温几分钟而不完全变性,因此想在溶液状态下去掉GFP的荧光是很难的,一般需要用光漂白法。
基于其非常稳定的结构,即便细胞被固定了,仍然会有一部分的GFP蛋白保持其构象而发出荧光。此时荧光可能较弱。在荧光显微镜下是有可能看得到的。
脂质体介导法
实验原理
上图所示是脂质体介导转染的示意图,它显示了外源质粒进入细胞的一般过程。
外源基因进入细胞主要有四种方法:电击法、磷酸钙法和脂质体介导法和病毒介导法。电击法是在细胞上短时间暂时性的穿孔让外源质粒进入;磷酸钙法和脂质体法是利用不同的载体物质携带质粒通过直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因进入细胞;病毒法是利用包装了外源基因的病毒感染细胞的方法使得其进入细胞。但是由于电击法和磷酸钙法的实验条件控制较严、难度较大;病毒法的前期准备较复杂、而且可能对于细胞有较大影响;所以现在对于很多普通细胞系,一般的瞬时转染方法多采用脂质体法。
利用脂质体转染法最重要的就是防止其毒性,因此脂质体与质粒的比例,细胞密度以及转染的时间长短和培养基中血清的含量都是影响转染效率的重要问题,通过实验摸索的合适转染条件对于效率的提高有巨大的作用。
上图是本次实验采用的脂质体中阳离子组分的结构的示意图。
本次实验采用的脂质体是promega公司的TransFast脂质体试剂,它是一种阳离子脂质体和中性脂质体的混合物,是对于本次实验中采用的293T细胞优化的转染试剂。
我刚开始做转染,悬浮细胞,分别做过表达和敲减,看了很多文献,大都没有提及转染后是用转染的这同一批细胞同时做pcr,wb,cck8,凋亡,细胞周期;还是说这次转染只做pcr或wb,再转染一次做cck8或细胞周期。剩下的功能试验均同前,转染一次做一次?我养的是悬浮细胞,转染后做cck8这些功能试验前需要离心换液吗?跪谢解答!
各位版友求助,
我使用Hek293构建转染模型,瞬转5质粒,用lipo2000做转染体系。
转染48h,发现荧光较强的细胞都在爬片的边缘,比例十分少。是因为我添加试剂的手法不对吗。
同时也发现加入转染体系后细胞状态特别差。想问一下用lipo2000时可以用无双抗的10%FBSDMEM吗。我转染前6h现在用的是纯DMEM,不含FBS。
请各位大神帮忙