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分子实验复习题
来自 : mayitao

SignaGen转染试剂超过3000篇世界一流科技论文引用
 
 
 
 

简介: 根据SignaGen公司专利聚合物合成技术,即PolyJet技术,脱氧核糖核酸体外转染试剂被指定为一种可生物降解的聚合物转染试剂,确保HEK293,COS-7,NIH-3T3,Hela,CHO及多种难以被转染的哺乳细胞等的有效且可再生转染。PolyJet试剂能在电泳期间低浓度固定脱氧核糖核酸迁移,并在5分钟内通过RT迅速形成转染复合体。试剂的一个卓越的特点是聚合物能够在转染聚合物细胞内吞(见图1)后迅速并完全降解聚合物,这样可大大降低细胞毒性。仅1.0ml的PolyJet试剂就足够进行24个试剂盒的300到600个细胞转染或6个试剂盒的150到300个细胞转染,这样就为各种常用的和难以转染的哺乳细胞等主导产品提供一个非常充裕的选择。

  图一。转染聚合物细胞内吞后Polyjet脱氧核糖核酸转染试剂降解聚合物的电脑模拟图特性 -在细胞内吞后可生物降解-特高滴定度的病毒生产-同样适用于长脱氧核糖核酸(>89千字节)-同样适用于单一脱氧核糖核酸转染和多重脱氧核糖核酸共转染-蛋白质重组的高产出-简单但高质量的转染工序-成本低储存条件 储存于4摄氏度环境。如存储得当,产品可保持稳定达12个月以上。 PolyJet 脱氧核糖核酸体外转染试剂用于常用细胞的转染效率:  
CellLinesEfficiency(%GFP)CellLinesEfficiency(%GFP)
McArdle7777Hep3DSHEP3T3-442ACOS-7CV-1D407DHDPro.b 3LLB16-F10BAECBHK-21CaSkiCaCo2CHOHCS-2/8HEK-293HeLaHLMECH-MVECHuh-7D12 ATT20SK-N-SHC2C12HepG265-70%67-76%68-71%35%85-90%60%70%70%80%85%51%80%88%60%88%61%86%88%72%59%72%46%29%46%72%SAOS-2SN56MC3T3-E1PrimarymelanocyteK562L929MCF-7MDCKNeuro2ANIH3T3PC12SH-SY5YSiHaSKOV3Huh-7IGROV1DF-1,ChickenEmbryonic Cell6CSFMEoWEHI231A549LNCapPrim.mousekeratinocytePrim.humanskinfibroblastPrim.humanpre-adipocytePrim. mouse embry. fibroblast58%81%80%35%38%59%68%68%86%76%50%25%60%65%70%35%50%71%26%75%7529%50%32%30%
 

 针对中国仓鼠卵巢(CHO)细胞,PolyJet转染效率同lipofectaminePlus试剂[由LifeTechnologies公司(BRL)生产的商品化细胞转染试剂,是合成的阳离子脂类DOSPA和DOPE的3:1(w/w)混合物]进行比较。标记HA的Beta微管蛋白DNA分别加入PolyJet试剂(左图)和lipofectaminePlus试剂(右图)被输送进仓鼠卵(胞。HA标记的FITC共轭抗体被用于提取HA-beta微管蛋白(绿色部分),而DM1a抗体被用于检测伴随罗丹明共轭二次抗体的内源阿尔法微管蛋白(红色部分)。上述图片由得克萨斯大学休斯敦医学院的ShangYin博士友情提供提供。 研究(通过HEK293FT细胞试验,PolyJet试剂的同主导试剂产品Lipofectamine2000相比后所展示的转染效率)。HEK-293FT细胞通过分别输入与GFP传染媒介(pEGFP-N3)结合的PolyJet试剂(左图)和Lipofectamine2000(右图)被转染。该细胞在转染后24小时可通过尼康Eclipse荧光显微镜进行观察。 比较研究(通过HepG2细胞试验,PolyJet试剂的同主导试剂产品Lipofectamine2000相比后所展示的转染效率)。HepG2细胞通过分别输入与GFP传染媒介(pEGFP-N3)结合的PolyJet试剂(左图)和Lipofectamine2000(右图)被转染。该细胞在转染后24小时可通过尼康Eclipse荧光显微镜进行观察。 TransfectionefficiencycomparisonofPolyJet™vs.FugeneHDonMDCKcells. AplainGFPDNAwastransducedintoMDCKcellswithPolyJet™ (leftpanel)andFugeneHD(rightpanel)reagentsrespectivelypermanufacturersprotocols.GFPandDAPIstainingwerevisualizedunderfluorescencemicroscopy48hoursposttansfection.TheabovecomparisondataandpictureswerecompletedandprovidedbyDr.GeZhouofNYUMedicalCenterascourtesy 比较研究(通过MDCK细胞试验,PolyJet试剂的同主导试剂产品Lipofectamine2000相比后所展示的转染效率)。MDCK属于极难转染的细胞。根据专有“削减细胞转染”协议,PolyJet试剂(左图)放弃了70%的GFP阳性细胞,相比之下,Lipofectamine2000(右图)的效率仅约为5%。MDCK细胞通过分别输入与GFP传染媒介(pEGFP-N3)结合的PolyJet试剂(左图)和Lipofectamine2000(右图)被转染。该细胞在转染后36小时可通过尼康Eclipse荧光显微镜进行观察。 比较显示转染效率的PolyJet™试剂与领先的产品,Fugene高清的LNCap细胞。LNCap细胞转染绿色荧光蛋白载体(pEGFP-N3型)的PolyJet™(左图)和Fugene高清(右)分别。转染24小时后,尼康的Eclipse荧光显微镜显示的差别图。  Neuro2A细胞通过输入与pEGFP-C1质粒相结合的PolyJet体外脱氧核糖核酸转染试剂被转染。Neuro2A细胞由转染后24小时可通过带DIC阶段显像(左)和FITC显像(右)的尼康Eclipse荧光显微镜进行观察。 .PolyJet体外脱氧核糖核酸体外转染试剂运用于主要鼠科皮肤纤维细胞上的细胞毒性与L2K进行比较。主要鼠科的纤维细胞与上述转染试剂/pEGFP-C1(脱氧核糖核酸)的复合体在完全不含血清的DMEM高葡萄糖媒介中和含有血清的媒介中分别培养达4个小时后进行观察。该细胞由转染后24小时可通过带DIC阶段显像的尼康Eclipse荧光显微镜进行观察。技术资料及数据清单 数据清单及协议草案 - GeneralProtocolforTransfectingMammalianCells - AdvancedProtocolforTransfectingHard-to-TransfectMammalianCells - ProtocolforLentivirusProduction 用户推荐: PolyJetTransfectionReagentworkedequallyaswellaslipofectamine2000,withlittleevidenceofcelldeathon293,PC-3and22RV1cells.Iwilldefiantlyconsiderswitchingover.-----TiffanyWallace,Ph.D.,June9,2009,NCI/NIHIonlydidsidebysidewiththetestingsample(PolyJet)andLipo2000withGFPtransfectiononCOS-7cells.Theresultwasverygood.PolyJetwasevenbetterthanL2K.------FengQiao,Ph.D.,Jun12,2009,NEI/NIHItestedthesampleofPolyJetonmyNIH-3T3mousefibroblaststhisweekend.TheresultsweremuchbetterthanLipofecatmineLTX.Imattachingapowerpointslidewithmyresults(Ididnotquantifythe%transfectionefficiency,butthepicturesgetthepointacross).Ifoundthattheprotocolfordifficult-to-transfectcelllinesworkedbetterthanthestandardprotocol.-----StephanieMurphy,Ph.D.,June29,2009,DartmouthCollegeIhadchancetotryyourproductfinally.Itwasgreatsuccess.IusedHeLacellsandgot10%transfectionefficiency(<0.1%forLipofectamine).Thankyou!IwaswonderingifIalsotryGenJet™PlusDNAInVitroTransfectionReagent?Accordingtoyourwebsite,thereagentworksbetterthanregularPolyJet.-------YumiUetake,Ph.D.,August11,2009,UMASSItestedPolyJetanditlooksgreatonMDCK.Weplacedorder.Thankyou!-------GeZhou,Ph.D.,August12,2009,NYUWearehappytoprovidefeedback.PolyJetworkedverywellforusinHepG2cells,wegotapproximately80%efficiencywithpMAXGFPplasmid,byfollowingtheconditionsinyoursuggestedprotocol.WeranacomparisonwithLipofectamine,whichonlyshowedapproximately20-30%transfectionefficiency.Weareplanningexperimentsandwillbeorderingmoresoon.-------EmilyMcallister,September3rd,2009,PBRC············

 

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