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科技服务+倍性育种整体解决方案
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动植物流式专家-科技服务/ 倍性分析解决方案业务内容:

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1)动植物倍性鉴定精确检测该样本是单倍体、二倍体还是三倍体、四倍体等多倍体,对于种质资源、单倍体育种、多倍体育种、非整倍体鉴定具有意义。还可以快速鉴定杂交育种是否成功;


2)基因组大小

预估通过参照物种计算待测样本基因组大小,为之后的基因组测序提供关键信息


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分析细胞周期的不同阶段,得到G1、S、G2期的细胞比例,对于研究辐射诱变育种,药物处理影响细胞周期变化具有意义科技服务核心


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2)报告速度快收到样本一周内即可出具检测报告,加急测试只需1-2天

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倍性育种整体解决方案

仪器+试剂+耗材+技术指导+售后服务的整体解决方案实现最高效率的倍性分析,无需摸索,即可获取成熟检测方案倍性育种整体解决方案


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1)仪器+试剂+耗材+技术指导+售后的综合服务,无需自行摸索实验条件,直接 获得成熟检测方案

2) 无需摸索样本取材、处理、试剂、耗材、数据分析等诸多环节,实验成功率高

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    要检测转基因小鼠(不知道)和正常鼠细胞免疫的改变(T细胞)需要做那些实验?


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    般可以用tracing dye,就说明增殖的越多。这样。以此类推,荧光强度衰减一半(分到两个子细胞了),被细胞摄取后不会被排出。如果细胞没有分裂增殖。每分裂增殖一次. 也就是一些荧光染料,那细胞的荧光强度最高,上机检测。增殖越多的细胞,先用染料染色,会出现几个逐渐减半荧光强度的峰值。经过数个细胞周期...   显示更多
    般可以用tracing dye,就说明增殖的越多。这样。以此类推,荧光强度衰减一半(分到两个子细胞了),被细胞摄取后不会被排出。如果细胞没有分裂增殖。每分裂增殖一次. 也就是一些荧光染料,那细胞的荧光强度最高,上机检测。增殖越多的细胞,先用染料染色,会出现几个逐渐减半荧光强度的峰值。经过数个细胞周期后。峰值和荧光强度减弱的越多   收起
  • 1,一个孔中应接种多少个细胞?

    当使用标准96孔板时,贴壁细胞的最小接种量至少为1,000个/孔(100μl培养基...   显示更多

    1,一个孔中应接种多少个细胞?

    当使用标准96孔板时,贴壁细胞的最小接种量至少为1,000个/孔(100μl培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低,因此推荐接种量不低于2,500个/孔(100μl培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验,请先计算每孔相应的接种量,并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK-8溶液。

    能否用384孔板进行试验?

    2,可以。向各孔中加入培养基体积10%的CCK-8溶液,如果加入的CCK-8体积太少,可以先将CCK-8溶液稀释1倍,然后加入培养基体积20%的量。

    3,能否用24孔板进行试验?

    可以。向各孔中加入培养基体积10%的CCK-8溶液。

    4,酚红会影响检测吗?

    不会。培养基中酚红的吸光度可以在计算时,通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不会对检测造成影响。

    5,CCK-8与胸苷结合检测之间是否有相关性?

    有。然而,请注意由于CCK-8使用的检测原理与胸苷检测的不同,因此结果可能不同。

    6,CCK-8能否检测细菌细胞?

    可以检测E.coli,但不能检测酵母细胞。向100μlE.coli培养液中加入10μlCCK-8溶液,并培养1-4个小时或过夜。

    7,CCK-8稳定吗?

    CCK-8在0-5℃下能够保存至少6个月,在-20℃下避光可以保存1年。如果需要长期保存,我们推荐-20℃的储藏条件。

    8,如果没有450nm的滤光片,还可以使用哪些其他滤光片?

    还可使用450nm到490nm之间的滤光片。

    9,如何减少由于CCK-8试剂在枪头上或孔壁上的残留所带来的误差?

    可以在加样前用培养基稀释CCK-8试剂并混匀后加样。

    10,CCK-8是什么颜色?

    应该是粉红色。若颜色不一样,有可能会影响测定。

    以上内容来自英格恩生物CCK8试剂盒


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  • 想知道关于干细胞增殖和分化之间的关系

    看到有人说干   显示更多

    想知道关于干细胞增殖和分化之间的关系

    看到有人说干细胞增殖能力强分化能力弱;分化能力强时增殖能力弱

    也看到有人实验是抑制细胞分化来促进细胞增殖

    想了解一下其中的机制有没有人介绍相关的文献或者是教材资料

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  • 细胞增殖是评价细胞活性、代谢、生理和病理状况的重要指标。检测

    1.MTT。...   显示更多

    细胞增殖是评价细胞活性、代谢、生理和病理状况的重要指标。检测

    1.MTT。

    MTT法检测原理:活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜(Formazan),而死细胞无此功能。用DMSO溶解甲臜后在490nm波长处测定其吸光度值,可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。

    MTT法检测细胞增殖算是比较常用的方法了,价格便宜,不过其甲瓒产物不溶于水,需有机溶剂溶解后方可检测,其增加了工作量,同时对结果的准确性产生影响,重复性较差吧。

    2.CCK8

    CCK8检测原理:CCK8中的主要成分WST®-8能被细胞内的脱氢酶还原为水溶性的橙黄色甲臜,生成甲臜的量与细胞数成正比,可间接测定活细胞数量。

    相比较于MTT而言,CCK8的灵敏度要更高,其生成的甲瓒产物溶于水,重复性和准确性上要优于MTT法,对于细胞的毒性较小,不过价格也是相比MTT要贵一截。

    3.通过标记DNA检测细胞增殖的常用的大概是Brdu和EDU用的比较多。

    Brdu是一种胸腺嘧啶核甘类似物,可代替胸腺嘧啶在DNA合成期(S期)参入正在复制的DNA中,之后我们通过抗Brdu的抗体与荧光二抗快速检测细胞的DNA复制活性。EDU也是一种胸腺嘧啶核苷类似物,能够在DNA复制时期代替胸腺嘧啶(T)渗入正在合成的DNA分子中,基于Apollo®荧光染料与EdU的特异性反应即可直接并准确地检测出DNA复制活性,类似于一种化学反应吧,而无需抗原抗体结合。

    相比较而言,Brdu或者edu更适合用于siRNA、miRNA、小分子化合物及其药物筛选等。同时Brdu或者EDU也适用于小鼠,大鼠及其他动物模型的各种组织器官(血管除外)的细胞增殖检测。关于Brdu和EDU的各自优缺点可以参考下帖。具体问题具体分析吧,目前来看EDU检测越来越普遍吧。关于Brdu检测细胞增殖,一种可以使用免疫荧光通过Brdu-FITC与DAPI双染判断细胞的增殖情况。

    一般对于细胞来说都是免疫荧光的常规步骤吧,只是需要一步盐酸进行变性DNA和中和。

    1.细胞铺板24孔板或者6孔板。可以进行加药处理细胞

    2.加入一定终溶度的BrdU继续培养一定的时间。随后弃去孔内溶液,PBS润洗3次。

    3.4%多聚甲醛固定细胞30min,PBS再润洗3次

    4.0.1%TritonX-100处理细胞15min后,接着PBS润洗3次

    4。接着2MHCl处理30min,再加入0.1M的硼酸中和10min,PBS润洗3次。

    5.滴加5%BSA室温封闭30min,弃去液体,滴加1:200稀释的BrdU一抗,4℃孵育过夜。

    6.次日,弃去一抗,PBS润洗5次,在避光条件下,滴加1:50稀释FITC标记二抗,室温孵育1h后,PBS再润洗5次。

    7.pbs洗5遍,滴加DAPI溶液,室温孵育5到10分钟,PBS洗5遍。

    8.荧光显微镜观察。拍照。只是需要注意的是细胞固定这一块吧,如果细胞固定不好的话,细胞容易连在一起而无法分清S期和M期等。同时容易造成细胞碎片吧。

    附张失败的图片。


    文献中完美的图片:


    图片来源:EthanolinducescytostasisofcorticalbasalProgenitors

    4.关于EDU,目前一般都是拿试剂盒做的,操作简单方便。步骤相比Brdu而言,少了DNA变性,无需抗体孵育等环节。





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  • 专属迷醉丶晛 1629136801
    细胞增殖的研究方法有很多,主要包括:BrdU,EdU,CCK8等方法。其中EdU检测方法是最新的细胞增殖检测方法。
    EdU是一种胸腺嘧啶核苷类似物,能够在细胞增殖时期代替T渗入正在复制的DNA分子,通过基于EdU与Apollo®荧光染料的特异性反应检测DNA复制活性,通过检测EdU标记便能准确...   显示更多
    细胞增殖的研究方法有很多,主要包括:BrdU,EdU,CCK8等方法。其中EdU检测方法是最新的细胞增殖检测方法。
    EdU是一种胸腺嘧啶核苷类似物,能够在细胞增殖时期代替T渗入正在复制的DNA分子,通过基于EdU与Apollo®荧光染料的特异性反应检测DNA复制活性,通过检测EdU标记便能准确地反映细胞的增殖情况。与BrdU检测方法相比,EdU检测方法更快速、更灵敏、更准确。EdU检测染料只有BrdU抗体大小的1/500,在细胞内很容易扩散,无需DNA变性(酸解、热解、酶解等)即可有效检测,可有效避免样品损伤,在细胞和组织水平能更准确地反映细胞增殖等现象。向左转|向右转   收起
  • 有丝分裂
  • 酵母细胞s期分布增加是周期阻滞还是细胞增殖
    细胞分裂间期分为G1期S期和G2期 G1期的特点:G1期是从上次细胞增殖周期完成以后开始的。G1期是一个生长期。在这一时期主要进行RNA和蛋白质的生物合成,并且为下阶段S期的DNA合成做准备。如合成各种与DNA复制有关的酶,线粒体、核糖体等都增多了<...   显示更多
    酵母细胞s期分布增加是周期阻滞还是细胞增殖
    细胞分裂间期分为G1期S期和G2期 G1期的特点:G1期是从上次细胞增殖周期完成以后开始的。G1期是一个生长期。在这一时期主要进行RNA和蛋白质的生物合成,并且为下阶段S期的DNA合成做准备。如合成各种与DNA复制有关的酶,线粒体、核糖体等都增多了
    细胞增殖是生物体的重要生命特征,细胞以分裂的方式进行增殖。单细胞生物,以细胞分裂的方式产生新的个体。多细胞生物,以细胞分裂的方式产生新的细胞,用来补充体内衰老或死亡的细胞;同时,多细胞生物可以由一个受精卵,经过细胞的分裂和分化,最终发育成一个新的多细胞个体。必须强调指出,通过细胞分裂,可以将复制的遗传物质,平均地分配到两个子细胞中去。可见,细胞增殖是生物体生长、发育、繁殖和遗传的基础。   收起
  • 筛选化合物抑制细胞作用,为什么出现促进细胞增殖的情况
    本研究从新合成的十种核苷类似物中筛选具有抗肿瘤活性的化合物, 观察其抑制肿瘤细胞增殖、诱导细胞凋亡的作用,并探讨可能的作用机制。
  • 1,CCK-8能否对活细胞进行染色?

    不能。因为CCK-8的主要成分是一种水溶性的四唑盐(WST-8),并通过电子载体<...   显示更多

    1,CCK-8能否对活细胞进行染色?

    不能。因为CCK-8的主要成分是一种水溶性的四唑盐(WST-8),并通过电子载体PMS将活细胞中的电子交换到培养基中的WST8上。由于生成的甲臜也是高度水溶性的,因此CCK-8不能对细胞进行染色。

    2,CCK-8检测溶液对细胞是否有毒?

    CCK-8溶液自身因为高浓度的PMS的存在而具有一点毒性。但是,加到培养基中的CCK-8是没有毒性的,因为被稀释了10倍。因此,长时间的培养,如过夜或者培养数天是可以的。同一个细胞培养液在CCK-8检测后还可以用于其他细胞增殖检测,如结晶紫检测,中性红检测或者DNA荧光检测等。由于每种细胞对于CCK-8的耐受力都不同,因此在需要进行长时间培养时,先检测一下细胞在加入CCK-8培养后的活力。

    3,在做加药实验时,药物对测定是否有影响?如何解决?

    有时会有影响。如果药物具有还原性,会和CCK8发生显色反应,增加吸光度。解决办法:首先要确认药物是否有吸收,在含有药物的培养基中加入CCK-8,测定450nm的吸光度,如果它的吸光度比不含药物的培养基(加CCK-8)的吸光度高,则证明药物有影响,可在加CCK-8之前更换培养基,去掉药物的影响。

    4,每次测定的数值不一样,是什么原因?如何解决?

    可能会有以下几个原因:1.当在培养箱内培养时,培养板最外一圈的孔最容易干燥挥发,由于体积不准确而增加误差。一般情况下,最外一圈的孔只加培养基,不作为测定孔用。2.有可能会因为CCK-8沾在壁上而产生误差,建议在加入CCK-8后,轻轻敲击培养板以帮助混匀。3.每孔的细胞数量过多或过少。请预先在1,000-100,000个/孔范围内摸索条件。

    5,如何设定空白对照?

    在不含细胞的培养基中加入CCK-8,培养一定的时间,测定450nm的吸光度即为空白对照。在做加药实验(细胞毒性实验)时,还应考虑药物的吸收,可在不含细胞,加入药物的培养基中加入CCK-8,培养一定的时间,测定450nm的吸光度作为空白对照。

    6,哪些物质会影响CCK8的测定?

    当有还原性物质存在时会影响CCK-8的测定,例如含有维生素C的Glucose等(一般培养基中的量不多,酚红或血清不影响测定)。在有酚红存在的情况下,会增加空白吸收,但不影响测定,扣除空白吸收即可。

    7,在实验中吸光度值太高,如果不能减少细胞数量,如何解决?

    可以缩短加入CCK-8后的培养时间。例如:可以把加入CCK-8试剂后的培养时间由2小时缩短为1小时。

    8,设定参比波长的目的是什么?必须设定吗?

    不一定要设定。CCK-8试剂在参比波长没有吸光度。设定参比波长的目的是为了取出由于样品混浊所带来的吸收。

    9,说明书上仅写了96孔板的测定方法,如果使用24孔板或12孔板,应该加多少量CCK-8试剂?

    一般情况下建议加入CCK-8试剂的量是培养基体积的1/10。

    10,在CCK-8显色过程中,如何终止反应?

    有一下几种方法(96孔板):①在显色反应后,将培养板放置4℃冰箱内。②每孔加10μl0.1MHCL溶液。③每孔加10μl的1%(w/v)的SDS(十二烷基硫酸钠)溶液。注意:反应停止后,应在24小时之内测定。

    11,必须预培养细胞吗?

    不一定。如果要向保持细胞的最好状态,建议预培养细胞。如果不做细胞预培养,细胞内的脱氢酶可能会不稳定。也有人不做细胞预培养,但在做标准曲线和检测时需要统一检测条件。

    以上内容来自英格恩生物CCK8试剂盒

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