摘自：汉邦科技

1、磷酸盐缓冲液

磷酸盐是生物化学研究中使用最广泛的一种缓冲剂，由于它们是二级解离，有二个pK_a值，所以用它们配制的缓冲液，pH范围最宽：

NaH₂PO₄：pK_a1＝2.12，pK_a2＝7.21

Na₂HPO₄：pK_a1＝7.21，pK_a2＝12.32

配酸性缓冲液：用NaH₂PO₄，pH＝1～4，

配中性缓冲液：用混合的两种磷酸盐，pH＝6～8，

配碱性缓冲液：用Na₂HPO₄，pH＝10～12。

磷酸盐缓冲液优点：

①容易配制成各种浓度的缓冲液；

②适用的pH范围宽；

③pH受温度的影响小；

④缓冲液稀释后pH变化小，如稀释十倍后pH的变化小于0.1。

磷酸盐缓冲液缺点：

①易与常见的钙Ca²⁺离子、镁Mg²⁺离子以及重金属离子缔合生成沉淀；

②会抑制某些生物化学过程，如对某些酶的催化作用会产生某种程度的抑制作用。

2、Tris（三羟甲基氨基甲烷）缓冲液

Tris缓冲液在生物化学研究中使用较广泛的一种缓冲剂，它的常用有效pH范围是在“中性”范围，如：

Tris-HCl缓冲液：pH＝7.5～8.5

Tris-磷酸盐缓冲液：pH＝5.0～9.0

Tris-HCl缓冲液优点：

①因为Tris碱的碱性较强，所以可以只用这一种缓冲体系配制pH范围由酸性到碱性的大范围pH值的缓冲液；

②对生物化学过程干扰很小，不与钙、镁离子及重金属离子发生沉淀。

Tris-HCl缓冲液缺点：

①缓冲液的pH值受溶液浓度影响较大，缓冲液稀释十倍，pH值的变化大于0.1；

②温度效应大，温度变化对缓冲液pH值的影响很大，△pK_a／℃＝－0.031，例如：4℃时缓冲液的pH＝8.4，则37℃时的pH＝7.4，所以一定要在使用温度下进行配制，室温下配制的Tris-HCl缓冲液不能用于0℃～4℃；

③易吸收空气中的CO₂，所以配制的缓冲液要盖严密封；

④此缓冲液对某些pH电极发生一定的干扰作用，所以要使用与Tris溶液具有兼容性的电极。

3、有机酸缓冲液
有机酸盐缓冲液是由羧酸与它们的盐配制而成，pH范围为酸性，即pH＝3.0～6.0，最常用的是醋酸、柠檬酸和琥珀酸等。

乙酸-乙酸钠和柠檬酸-柠檬酸钠缓冲体系使用的较多：

乙酸盐pK_a值：pK_a＝4.76

柠檬酸有三个pK_a值：pK_a1＝3.10，pK_a2＝4.75，pK_a3＝6.40。

琥珀酸有二个pK_a值：pK_a1＝4.18，pK_a2＝5.60。

有机酸缓冲液缺点：

①所有这些羧酸都是天然的代谢产物，因而对生化反应过程可能发生干扰作用；

②柠檬酸盐和琥珀酸盐可以和过渡金属离子（Fe³⁺、Zn²⁺、Mg²⁺等）结合而使缓冲液受到干扰；

③这类缓冲液易与Ca²⁺离子结合，所以样品中有Ca²⁺离子时，不能用这类缓冲液。

4、氨基酸缓冲液

氨基酸缓冲液使用的范围宽，可用于pH=2.0～11.0，最常用的有：

甘氨酸—HCl缓冲液：pH=2.0～5.0，

甘氨酸—NaOH缓冲液：pH=8.0～11.0，　

甘氨酸—Tris缓冲液：pH=8.0～11.0，

组氨酸缓冲液：pH=5.5～6.5，

甘氨酰胺缓冲液：pH=7.8～8.8，

甘氨酰甘氨酸缓冲液：pH=8.0～9.0。

氨基酸缓冲液优点：

为细胞组份和各种提取液提供更接近的天然环境。

氨基酸缓冲液缺点：

①与羧酸盐和磷酸盐缓冲体系相似，也会干扰某些生物化学反应过程，如代谢过程等。

②试剂的价格较高。