*请输入10-500个字符
已帮助
0人
0人
夜光系807
用户
PCR技术的应用目的基因的直接克隆与常规的基因克隆方法相比,PCR的优点是快速,简单,但是用PCR克隆目的基因的限制是必须知道侧接靶序列的核苷酸序列,以制备引物.因而该法具有很大的局限性.可直接利用具有平端的PCR产物进行克隆,但利用合适的引物,在待克隆的目的基因二侧引入不同的限制性酶切点,则可将扩增之后的目的基因定向克隆到载体中,避免载体的自身环化,提高克隆效率.cDNA的克隆利用PCR技术,只需增加一步逆转录反应,便可从少数mRNA的构建cDNA文库,以mRNA为模板,以oligo(dT)为引物,在依赖于RNA 的DNA聚合酶催化下体外合成cDNA第一链之后,可通过PCR扩增此链.如在此链的3'端再加上一段鸟苷酸残基同聚物,则可以使用oligo(dT)和oligo(dC)作为后续PCR扩增的引物,也可酌情在这些引物的5'端加上限制性酶切点,以利于将所得的双链DNA克隆到适当的载体中.在某些情况下,如已知RNA(或其基因)两端的核苷酸序列,mRNA5'端核苷酸序列或其编码的蛋白质N端的氨基酸序列,便可设计特定的两端引物,用于直接克隆特定的目的基因cDNA,从而省略从cDNA文库中筛选cDNA克隆等序列费时的操作.
▍
相关分类
▍
相关文章
定量检测细胞凋亡的ELISA法
人优球蛋白(EL)Elisa试剂盒YS06035B_公司
计量器具的强制检定、非强制检定和校准区别
几种cDNA差减文库构建方法的比较
大黄素1O葡萄糖苷 标准品 CAS: 38840232
iQ 荧光定量PCR仪专用96孔板_价格厂家供应商_伯乐生命医学产品(上...
寒假社会实践总结: 聚焦民生 关注社会【精品范文】_百度文 ...
若想测量准确PH值应知道如何保养pH计
—数字PCR简介 阎影
金域医学：规模+技术，ICL领军者迈入新篇章_一万个兵的 ...
SigmaAldrich标准品 *详细购买说明|产品资讯
病毒基因组DNA/RNA快速提取试剂盒说明书_价格厂家供应商_
▍
相关问答
