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电工试验思考题答案.doc_
来自 : mayitao
提供商:和元上海
服务名称:逆转录病毒包装/逆转录病毒载体/Retrovirus
规格:TU/ml

逆转录病毒包装/逆转录病毒载体/Retrovirus

 

逆转录病毒介绍:

逆转录病毒(Retrovirus)是一种RNA病毒,在复制时需在逆转录酶的作用下首先将RNA转变为cDNA,再在DNA复制、转录、翻译等蛋白酶作用下扩增。它的基因组有三个基因:gag-编码病毒的核心蛋白;pol-编码逆转录酶;env-编码病毒的被膜糖蛋白。

逆转录病毒的DNA基因组整合在宿主染色体上的位点是随机的。逆转录病毒DNA的整合是复制病毒RNA的必经阶段。只有当受感染细胞处于细胞分裂期间,逆转录病毒DNA基因组才能接触到宿主细胞的遗传物质。因此,逆转录病毒只能在分裂中的细胞内复制(图1)。和元上海包装高滴度逆转录病毒,供不同实验需求。

逆转录病毒作用机制

图1逆转录病毒作用机制

逆转录病毒用于分裂细胞特异性感染,表达稳定高效。逆转录病毒的亲嗜性存在物种之间的差异,据此可将其分为三类:
    (1)单嗜性逆转录病毒(ectropicretrovirus),只感染小鼠和少数几个品种的大鼠;
    (2)兼嗜性逆转录病毒(amphotropicretrovius),能感染小鼠的细胞,也能感染其他种属动物的细胞;
    (3)异嗜性逆转录病毒(xenotropicretrovirus),能感染多种动物细胞,但不能感染小鼠细胞。

 

目前使用较多的是兼嗜性逆转录病毒,即以兼嗜性包装细胞包装病毒颗粒。逆转录病毒的宿主范围由病毒颗粒表面的包被蛋白(Env)决定,病毒基因组不影响其靶向性,不同的基因组可用相同的Env包被,且Env来自何种病毒,包装出的病毒颗粒就叫该病毒的假病毒。

和元上海逆转录病毒的生产和质控采取了国际学术界公认的标准流程,采用三质粒系统在293T细胞中进行包装。所获得的病毒颗粒经过超速离心纯化,并通过qPCR对病毒滴度进行测定。一般情况下我们的逆转录病毒滴度在107~108TU/ml,完全可以满足各类实验的使用要求。

病毒相关技术服务:

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