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发布人逗比2号发布时间 2021-09-18

我想用pGL3-ControlVector质粒与某基因构建重组载体与MicroRNA共转染进行荧光素酶报告基因检测，这样可行吗？

发布人霸道AQik3 发布时间 2021-09-17

目的针对促肝细胞再生磷酸酶1(phosphatase of regenerating liver-1,PRL-1)3’端非翻译区(3-untranslatedregion,3’UTR)构建PRL-1荧光素酶报告基因载体及突变体,为研究miR-339-5p在结肠癌中调控其靶基因PRL-1提供有效的工具。方法 PCR扩增包含PRL-1的3’UTR的DNA片段,克隆至荧光素酶载体psiCHECK-2,构建psiCHECK-2/PRL-13’UTR载体;经双酶切及测序鉴定后,对psiCHECK-2/PR...

构建基因表达载体的四个基本组件是( )A.复制原点.抗生素基因.内含...

发布人纞丄微笑发布时间 2021-09-15

基因表达载体的构建是基因工程的核心步骤，而基因表达载体的本质是DNA，组成元素有碳氢氧氮磷，其中氮在含氮碱基中，磷在磷酸基团中完整的表达载体必须包括：1、复制子,在细菌中扩增时所必须.2、启动子,目的基因在细菌或细胞中转录所必须,转录了才能翻译,是谓“表达”.3、原核筛选标记,细菌增菌所必须.4、真核筛选标记,如果是真核表达,就是必须的.5、多克隆位点,即酶切位点,插入目的片段的区域.6、其他所需构件,可视实验设计情况而选用现成载体或在载体上自行添加.另：表达的起始和终止,在目的基因上附带起始密...

下列可作为基因工程技术中载体的是（）A.动物病毒B.大肠杆菌C.叶绿...

发布人发布时间 2021-09-11

质粒和噬菌体载体只能在细菌中繁殖，不能满足真核DNA重组需要。感染动物的病毒可改造用作动物细胞的载体。由于动物细胞的培养和操作较复杂、花费也较多，因而病毒载体构建时一般都把细菌质粒复制起始序列放置其中。使载体及其携带的外来序列能方便地在细菌中繁殖和克隆，然后再引入真核细胞。目前病毒载体常用者有改造来自猴肾病毒SV40（Simian Virus 40）、逆转录病毒和昆虫杆状病毒等，使用这些病毒载体的目的多为将目的基因或序列放入动物细胞中表达或试验其功能、或作基因治疗等（见后）。人基因组十分庞大，约...

几种表达载体

发布人 Doctor-pxz 发布时间 2021-09-08

各位大神，我现在用PET28α作为表达载体，在连接的时候是不是载体要进行双酶切、胶回收?我双酶切的目的片段和PET28α连接后，导入感受态中没有成功，不知道怎么回事，请教各位。

GUS报告基因

发布人唯爱一萌449304 发布时间 2021-09-06

如何利用GUS报告基因检测所需基因标记基因通常用来检验重组DNA载体转化成功与否，或者检测目的基因在植物细胞或组织中的定位。常用的标记基因是一些抗生素抗性基因，如卡那霉素抗性基因、潮霉素标记基因等。如：某种具有氨苄抗性基因质粒（该基因即可认为标记基因），与外源DNA片段组合形成重组质粒，并被转入受体细胞后，就可以根据受体细胞是否具有氨苄抗性来判断受体细胞是否获得了目的基因。当用选择培养基（比如含有氨苄的培养基），来培养受体细胞时，能够在培养基中存活下来的受体细胞就可以认为是成功的导入了外源DNA...

基因治疗中病毒载体应具有的基本条件有哪四个？_问答详情_蚂蚁淘,...

发布人 ANNING67 发布时间 2021-08-31

1、病毒易于培养和分离纯化；2、人体病灶细胞或者分泌型细胞有载体病毒受体；3、DNA病毒，且酶切改造后具有复制能力；4、表达产物对载体病毒没有抑制作用。不知道是否准确，希望对你有帮助。

怎样构建RNA干扰载体求具体的答案谢谢

发布人 guiping0859 发布时间 2021-08-30

1 确定基因中同源性小的片段做干扰载体的目的片段，防止干扰到材料中含有的其他同源基因；2 确定干扰载体中可以用的2个酶切位点，3 设计2对带有不同酶切位点的引物，分别扩增正、反向片段，并检查序列是否正确没有突变；4 将正向片段连接到酶切过的干扰载体中，pcr鉴定； 5 再将反向片段连上去，pcr鉴定。

基因表达载体中标记基因的作用到底是什么呢【高中生物吧】_百度...

发布人 LR13Q 发布时间 2021-08-28

基因工程中标记基因必不可少，基因工程的核心步骤，构建基因表达载体，中用标记基因检测重组质粒是否已经导入受体细胞中，从而区分己导入细胞和未导入细胞。(标记基因通常是抗生素基因。)似乎都是鉴定目的基因是否导入受体细胞没有鉴定是否成功导入质粒的鉴定目的基因是否导入受体细胞有四个层次 1 直接鉴定受体细胞中是否有目的基因用DNA分子杂交 2 鉴定目的基因是否转录分子杂交（mRNA） 3 目的基因是否表达抗原-抗体（蛋白质） 4 看受体细胞发育成的个体是否表现出相关性状

引物延伸

发布人美食的俘虏345 发布时间 2021-08-26

先看表达载体有哪些合适的酶切位点，比如NdeI,NcoI这样识别序列有ATG起始密码子的，再看看目的基因含不含有这些位点，含有就不好连接了，挑好位点，计算下读码框是否正确，保证核糖体结合位点后的第一个ATG与目的基因是间隔3的倍数个碱基。下游的位点更好选，如果有6xHis标签，想融合表达的话，就注意下要是同一读码框，同时利用载体的终止密码子，如果没有这样的需要，就利用目的基因本身的终止密码子好了。基本是这样，具体还是看看书吧。向左转|向右转

慢病毒载体的启动子报告基因核酸基因技术讨论版论坛

发布人 feifei83 发布时间 2021-08-24

请教一下，一般做启动子报告基因检测，载体用pGL3,pGL4双荧光报告基因质粒，但pGL3,pGL4都只能做瞬时转染，我的细胞（不想用293做实验）质粒转染后都会死很多，还要加上一些处理因素（比如药物，饥饿等），细胞状态更不好了。所以想找一个慢病毒骨架的报告基因质粒。上网查了下，SBI的pGreenFire1和Genecopia的Gluc-ON是慢病毒质粒。1.pGreenFire1可以检测Luc和GFP，但用什么做内参呢？查了下文章，有的文章检测Luc的时候同时检测一个MTS读数做内参；另外有...

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