【求助】超声破碎仪提取总RNA和基因组DNA

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2021-08-12

问题描述：

能用超声破碎仪提取总RNA和基因组DNA吗？
我问了两个实验员，一个说可以，一个说不行。
说不行的理由：1：会把RNA和DNA打断。2：超声破碎过程中会产热，会降解RNA。
请问有人用过破碎仪提取总RNA或基因组DNA吗？如果能，请问电压调到多少？还有哪些要求。
另外关于破碎仪消毒的问题，能用酒精棉球擦拭，再用无菌棉片檫干，再放入trizol中超声破碎吗？还有没有更好的方法？
谢谢！

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duzhengde

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顶起！盼高人解答。谢谢！

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唯一卫

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能！我和同学提取肝脏组织的蛋白和RNA都是用的超声细胞破碎仪，注意放在冰上操作，组织粉碎即可，具体电压不记得了。用酒精棉球擦拭，再用无菌棉片檫干消毒后，再放入trizol中超声破碎，然后按提取步骤操作就行了。提取出来的RNA沉淀还是很多的，后续的结果也可以，可以试试。

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zwenh

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请问电压和时间？

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songtion

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不推荐使用，确实存在问题1：会把RNA和DNA打断。2：超声破碎过程中会产热，会降解RNA。如果构建CDNA文库一定不要使用，但是普通的rt可以使用肝脏的酶活性很强，推荐使用液氮研磨

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duzhengde

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谢谢楼上各位的回复！

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a831117

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也没有什么电压和时间吧，那个东西，打的时间长一点点，头就特别的热，所以一般都是在磨的过程中备一瓶带冰的NS，一般都是十五秒一停，然后就放入带冰的NS中降一下温，电压好像总有两三档来着，能打碎就OK。如果是DNA还行，RNA还是像楼上推荐的液氮研磨。

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annette_1

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songtion不推荐使用，确实存在问题1：会把RNA和DNA打断。2：超声破碎过程中会产热，会降解RNA。如果构建CDNA文库一定不要使用，但是普通的rt可以使用肝脏的酶活性很强，推荐使用液氮研磨如果是培养的肝细胞可以用液氮研磨吗，因为加trizol之后感觉裂解不完全，如果加了trizol怎么用液氮研磨呢？

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郭晓静

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我用超声破碎血块最后pcrp出来了

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