有人做过CHO细胞的电击转染实验吗？

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有人做过CHO细胞的电击转染实验吗？

2017-11-08

问题描述：

我做的转染效率太低，求高人指点。最好能说下过程和相关的实验参数。我是按照Eppendorf网站上给出的资料做的，可是转染效率实在低的可怜，用的buffer是按照Eppendorf网站上的自己配的。求高人指点迷津。急急急！！！

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我用的是伯乐公司的电转仪。1电转细胞的准备1.1贴壁细胞（1）电转前1-2天，将细胞转移至75cm2细胞培养瓶培养，至转化前使细胞汇合度约50-70%。此时细胞数约为2-10x106，而每次电转需约1-10x105个细胞。（2）12ml PBS缓慢冲洗细胞。（3）吸出PBS，用0.4ml胰蛋白酶消化细胞。（4）加入10ml含血清的培养基，中和胰酶。（5）400x离心5-7min收集细胞。（6）用PBS、Hepes、无血清培养基等重悬细胞，使之密度为1-5x106cell/ml。1.2悬浮细胞基本等同1.1。2电转化（1）设置电转程序，或选择预设程序。（2）将线性化的重组质粒加入电转杯，所需质粒量根据细胞不同而定，一般起始浓度为10-50ug/ml。（3）向电击杯中加入细胞，颠转电击杯使之混匀。细胞浓度和体积的使用建议请参照表一。（4）将电击杯放入电击槽中，脉冲电击一次。（5）脉冲后，将细胞转移至已含0.5ml培养基的孔中（6）轻轻晃动孔板，使细胞均匀分布，培养箱培养。（7）电转24-48小时后，基因瞬时表达。表一电击杯(cm)细胞浓度(cells/ml)细胞体积(µl)电击后生长条件0.21x10610048孔板 0.5 ml 生长培养基0.25x1064006孔板2 ml生长培养基0.42.5x1062006孔板 2 ml生长培养基提高质粒量至20ug以上可是转化效率达到70%以上。展开

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