【求助】为什么我配制的电泳缓冲液是酸性的？
2021-07-23
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logust
用户
我感觉可能是tris的问题
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haina168
用户但是tris我单独配了一点，PH值8.8多
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supermaltose
用户tris通常单独配出来有10以上你没用错tris·HCl吧？
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haina168
用户tris还有多种吗？
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haina168
用户能否用NaHO去调电泳液的ph？
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zhangmingshund
用户不是直接加MILLIQ水1000ML,是要定容到1000ML.你配错了.
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haina168
用户我是最后定容到1000ml的，上面写错了。
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supermaltose
用户也就是tris碱和被盐酸中和的tris盐酸两种最简单的就是到其他试验室借点tris，或者自己重新买点，配一次看看是不是一样的问题，就知道是不是tris的问题了。tris不算很贵，在缓冲盐里面算便宜了
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hencyfaith
用户Tris-base就是碱性的啦。你的配方肯定没错，我就是这么配的。会不会是你用的水的原因啊。不同级别的水配出来的溶液的酸碱度是不同的。另外就是药品没开过并不表示就没变质，你换瓶试试吧。
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haina168
用户谢谢大家，我打算买新的tris试试。
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haina168
用户水是三蒸水，应该没问题吧，科室都是用那个水配液体的。
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haina168
用户tris买了新的了，但是配出来的电泳液还是很酸，ph6.4左右。然后测了下我们实验室的三蒸水，ph是5.4，是不是这个水的问题？三蒸水正常ph是多少？前辈们帮我分析下原因吧。
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玻璃翠
用户真奇怪啊，我怎么从来没有碰见过这么个问题呢？
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玻璃翠
用户估计是水的问题。你测一测自来水的pH。用自来水配一点看看。最大的可能是tris的问题。tris的质量很重要，千万不要买杂牌的，质量不稳定。甘氨酸很便宜，考虑用个进口的，500g，才几十块。所有的东西都换质量好的东西，要是还这样的话。那就是你那里的风水有问题了！！！。你直接买个混合好的试剂袋吧，
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dreonixhumber
用户三蒸水，ph是5.4没什么问题,用miliq的水ph低于5也没有出过问题的。
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牛奶糖
用户我感觉应该是水的问题！三蒸水的pH不会那么酸的！理论上应为7，但实际上应该是稍偏酸性。不过我也没有试过低于5左右的水配出来的溶液是什么状况。你可以用其他实验室烧的三蒸水试试！另外你可以用其他室的水直接配制成一倍的溶液看看pH是多少，一般这个配方配出来的溶液不用调pH就达到8.3了.
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njlf1258
用户你这好像是5×缓冲液吧，好像甘氨酸多了，应该是72g。水的pH是偏酸，一般不会有问题。
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supermaltose
用户我也是加的94g的甘氨酸。说实话，我从来没测过配出来的溶液pH值不过电泳也基本上没出过问题，条带都挺好看的。纯净水都会带一点酸性的，因为会有一点碳酸的存在不过既然配的是缓冲液，顾名思义就是要有缓冲能力的这么一点点酸性无关紧要的而且更重要的是对于大多数的普通级别pH计是不应该用来测量纯净水的pH值的大多数普通pH计需要一定的电解质浓度测量纯净水不但侧不准，也损害pH计如果害怕是水的问题也可以试试看配点PBS看看pH差的多不多。如果其他实验室有这三样东西，可以把你的和他的tris/gly/sds一个个单独配成溶液测一下pH值比较一下。
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haina168
用户首先谢谢大家的热心帮忙。上面配的是5×的，后来有老师说是不是甘氨酸多了，就按72g去配，结果还是很酸。我做的是明胶酶谱实验，就是在page中加了明胶来测金属蛋白酶的活性，各种缓冲液的ph对酶的活性影响很大，所以这么追求PH值。tris我单独配是8.8以上，甘氨酸用三蒸水配了下6.4大概，sds接近中性。现在就是想三蒸水为什么会那么酸呢？我们这里的水是医院里产的，大家都用这个水。这几种原料中也就tris是碱性的。我们配pbs时ph值不会相差很大。郁闷死。也问了其它实验室的同学，他们也是按这个配方配的，但是他们没去测过ph值，我叫他下次配的时候也测测看。下一步打算找公司，要现成的，问问他们买的缓冲液ph多少？
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zl13142wh
用户Tris碱是有缓冲能力的啊，三蒸水的酸度还不至于影响到最终液体的PH值吧，并且三蒸水一般都有点偏酸的，楼主的情况都属正常，按楼上说的，用其他实验室的几样试剂配配看，测完不放心就再用ph试纸看看，如果还是酸性的，那建议你考虑写篇文章了，呵呵
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小熊的猫
用户我们这的纯化水是6.0的，也没影响。配出来的缓冲液还略大于8.3呢。确定pH计没什么问题吗
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supermaltose
用户要么你去其他实验室要点tris配溶液来测测看？我即使配很稀的tris，ph值都要在10以上的
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haina168
用户我用的是ph试纸测的，我们实验室配其它的液体也是用那个ph试纸，tris是新买进口分装的，估计应该没有问题吧，我现在配了ph值还是6.4的样子。无奈了我现在想问下前辈们，能否配好后用NaHO去调到8.3呢？
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zl13142wh
用户用NaOH调Ph当然可以，可是现在你的问题是要么Tris，要么Ph测量方面有重大问题，说不定你认为是6.4，而pH计测出来就在八点多，我认为在用NaOH调之前先找出出问题的环节。Tris是碱性的，并且具有很强的缓冲能力，所配的溶液Ph绝不会是酸性的。
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haina168
用户我还是买了试剂公司现成的电泳液了，10×的，稀释后ph差不多8.3
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moutan
用户呵呵，我也遇到一样的问题，真实情况是5*的时候PH是6.4，稀释后就是8.3.因为我们没想到稀释前后酸碱平衡会改变那么大，所以一直走不出自己设的圈子。
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haina168
用户会这样嘛？那还叫缓冲液？你看你这样一说我倒要试试，谢谢，呵呵。
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