组分 规格 | 20T | 100T | 500T | 1000T | 开封后保存温度 | 稳定性 |
A.10 mM EdU | 40 µL | 200 µL | 1 mL | 2×1mL | -20℃ | 开封后按指定温度保存可有效放置一年 |
B.YF® 488/555/594/647A Azide | 10µL | 50 µL | 250 µL | 500 µL | -20℃，避光 | |
C.10× Click-iT EdU反应缓冲液 | 200 µL | 1 mL | 5 mL | 10 mL | 2-8℃ | |
D.CuSO4 | 100 µL | 500 µL | 2×1.25 mL | 5 mL | 2-8℃ | |
E.Click-iT EdU缓冲液添加物 | 6 mg | 30 mg | 150 mg | 2 × 150 mg | 2-8℃ | |
F.Hoechst 33342 | 5 µL | 25 µL | 125 µL | 250 µL | 2-8℃ |
规格：上述反应次数针对96孔板培养的细胞。荧光光谱数据：YF® 488 Azide：495/519 nm；YF® 555 Azide：555/565 nm；YF®594 Azide：590/617 nmYF® 647A Azide：650/670 nm；Hoechst 33342：350/461 nm（bound to DNA）储存条件-20℃避光保存，有效期见外包装。开封后，保存温度详见说明书。产品介绍细胞增殖检测是评估细胞健康程度、遗传毒性及抗肿瘤药物效果的基础实验手段。检测细胞增殖最精确的方法是 BrdU法。EdU法检测试剂盒是BrdU法的革命性突破。EdU（5-乙炔基-2’-脱氧尿苷）是一种嘧啶类似物，在DNA合成 期整合入DNA双链。EdU法检测基于“点击”反应，一种由铜催化的叠氮化合物和炔烃作用发生共价反应，形成共价键。本试剂盒中，EdU含有炔烃，YF®488/555/594/647A Azide染料含有叠氮化合物。点击法的EdU标记增殖快速有效，易于使用。BrdU方法需要DNA变性（如酸变性、热变性或者用DNase消化）暴露出BrdU，从而方便BrdU抗体结 合；而EdU法只需标准化的多聚甲醛固定和Triton X-100促渗就可以使检测试剂进入细胞，只需少量的叠氮化染料即可非常有效地标记出整合的EdU。本试剂盒包含EdU法检测所需要的所有组分，可以用于体外培养细胞的增殖检测。
UE-C6045S/C6045M/C6045L/C6045XL◆YF®488/555/594/647有什么区别？
主要就是检测EDU的物质带的荧光基团不同，检测时发射荧光的颜色不同。实验效果相同，可根据偏好或需求进行选择。◆EdU试剂盒中，固定后3% BSA in PBS的作用是什么？清洗步骤中，BSA可以终止掉未反应的甲醛。◆能否在活细胞中进行Click-iT EdU检测？不可以。虽然EdU是对活细胞进行代谢标记，但是叠氮化物检测试剂和缓冲液组分是细胞非透过型，检测信号时的Click反应必须在固定和通透的样品上进行。◆质粒转染表达的荧光蛋白检测与Click反应兼容吗？检测顺序是什么？本产品会影响GFP、RFP、mCherry等荧光蛋白的荧光，故染色后无法直接检测GFP，建议使用GFP抗体间接检测。◆观测到较高的本底干扰，这是什么原因所致？如何减少本底干扰？叠氮化物和炔烃类间Click反应非常有选择性，生物体内几乎不可能有副反应发生，所以本底较高一般是由洗涤不充分造成的。减少本底干扰的最佳方法是增加BSA洗涤的次数。同时，也可在同样的检测条件下设置一组同等处理的无染料或无Click反应对照，以排除自发荧光干扰。此外，您还可在无EdU 体系中进行完整的Click反应，验证Click反应信号的特异性。◆为什么标记样品无信号或特异性信号非常低？如何提高信号？1.请保证试剂使用时为无色的状态，不要使用已经变黄的添加剂或缓冲液；2.为确保Click反应试剂能够到达核内，细胞需要充分地固定和通透；3.由于铜离子能结合到部分试剂上，这会导致催化Click反应的有效浓度降低。所以在Click反应前，不要在任何缓冲液或试剂中引入金属螯合剂（例如EDTA、EGTA、柠檬酸盐等），对某些含有这些物质的实验样品来说，进行Click反应前，可能需要增加额外的洗涤步骤；4.当铜离子在合适的化合价时，Click反应才有效。Click反应中用到的铜离子为二价铜(Cu2+)。5.延长Click反应的时间至超过30分钟也并不会提高信号。建议使用新鲜的Click反应试剂再次进行30分钟的孵育，可更有效地提高标记效率。◆如何对细胞核进行复染？试剂盒中配有Hoechst 33342，可以在Click反应后用于细胞核的染色，也可选择使用DAPI。◆可以用于检测植物细胞核内的DNA复制吗?可以。EdU是小分子，可以穿透植物细胞的细胞壁。
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各位，最近几个月一直在帮着公司进口细胞株，我是新手，从来没有接触过这样的业务，摸着石头过河，遇到了很多问题，也得到了很多教训和经验，不敢独享，觉得还是分享一下吧，给有需要的指指道，希望能少走弯路。
先不多说，正文如下：
大家看好了，我写的是企业进口细胞株，不是针对高校或者别的什么科研机构，因为到目前为止国家还没有一个正式的文件去指导企业进口细胞株，只有一个过渡性文件，因此各地操作时也有些不同，除了北京、上海、广东等一些发达的地方有操作程序，其他地方由于企业进口细胞株的案例很少，因此很麻烦的（比如黑龙江，我们最后都找到省卫生厅厅长了）。
首先，你们公司如果选择购买一个国外的细胞株，最先考虑的是付款问题，你得找一家进出口代理公司，帮你操作，这个都是比较常规的，另外你最好再找一家在北京或者上海的公司帮助清关。这里有涉及到“进口代理协议”和“供货合同，我们当时是签了一个三方合同”，这里一定要注意和国外沟通好，需要进口的细胞株的名称、数量、价值等等，后期发货的时候千万不要不一致。
因为细胞株是特殊物品，需要从省卫生厅那里拿到一个“医用特殊物品准出入境证明”，这个东西很难搞的（高校或科研机构容易一些，基本上都有程序），尤其是一些没有先例的省份（领导不敢批，怕担事），我们公司就是黑龙江的先例，这个东西不知道怎么办的到时候可以找我私聊。搞这个东西的正常周期是2-3周，请注意，一定要把准出入境的有效时间尽量写长一点，还有就是主送单位一定要你所清关的口岸的检疫局，例如北京口岸入境，就写北京出入境检验检疫局。当时没人提醒我，这两个我都搞错过，结果多跑了几次，我们的国家服务人员态度一次比一次差，快气死了，不过后来还是搞到了。
拿到“医用特殊物品准出入境证明”以后，预付款也打了，国外准备要发货了，这之前还要一个“特殊物品入境审批单”，这个需要到你所清关的口岸的检疫局搞，下面以北京出入境检验检疫局为例，这个东西要是你是外地的（非清关所在口岸）是搞不到的，你得先去北京出入境检验检疫局备案（就是公司证照原件，情况说明，单位说明等等，比较好办），然后在你细胞株进口之前2-3周申请（1周能批，有效期3个月）。我当时是委托北京一家公司办的，因为你自己办是不方便的，到时候审批单还要亲自去取，外地的很麻烦。
箱单、发票就不说了
接下来是运输，细胞株一般都用干冰运输，当然也可以选择液氮，不过价钱不一样，液氮要比干冰贵40%左右。要计算好运输过程中干冰损失量，量要足够，最好放一个温度记录仪，如果你没有把握，在货物到港清关之前，也可以加干冰的，就比较贵，单次1000元左右。发货之前一定和发货方、运输公司沟通好，标签和数量一定要准入证明和审批单一致，要不然清关很麻烦的，我再次犯了一个错误。
最后就是清关了，这里一定要注意，你找的清关公司的清关能力一定强，一定是做过冷链清关的。
总结一下：
程序是：签合同，找进口代理和清关公司，办理相关证明文件，选择冷了运输公司，运输，清关。
文件：合同、代理协议、医用特殊物品准出入境证明、特殊物品入境审批单、发票、箱单等。
另外，这里面还有不少细节，我就不一一说了，如果真有这方面运输的，可以找我。
版主horizon801留言:
谢谢分享
1.培养基最好是培养原代细胞专门的培养基或说是配套的培养基; 2.关键还是生长因子等的浓度; 3.如果需要的话,需要明胶包被.
1、 缓冲溶液对反应物的测定没有干扰
2、缓冲组分的浓度为1:1
3、有足够的缓冲容量
4、缓冲溶液的PH应在所需范围内
5、组成缓冲溶液的弱碱PKB和弱酸PKA应接近或等于所需的POH值或PH值（PH+POH=14）
配制
只要知道缓冲对的PH值，和要配制的缓冲液的pH值（及要求的缓冲液总浓度），就能按公式计算[盐]和[酸]的量。这个算法涉及对数换算，较麻烦，前人为减少后人的计算麻烦，已为我们总结出pH值与缓冲液对离子用量的关系并列出了表格。只要我们知道要配制的缓冲液的pH，经查表便可计算出所用缓冲剂的比例和用量。例如配制500nmpH5.8浓度为0.1M磷酸缓冲液。
经查表知pH5.8浓度为0.2M Na2HPO48.0毫升，而0.2M Na2HPO492.0毫升。依此可推论出配制100ml0.1M的磷酸缓冲液需要0.1M Na2HPO48.0毫升，而0.1M Na2HPO4需要92.0毫升。
计算好后，按计算结果准确称好固态化学成分，放于烧杯中，加少量蒸馏水溶解，转移入50ml容量瓶，加蒸馏水至刻度，摇匀，就能得到所需的缓冲液。
各种缓冲溶液的配制，均按表格按比例混合，某些试剂，必须标定配成准确浓度才能进行，如醋酸、氢氧化钠等。另外，所有缓冲溶剂的配制计量都能从以上的算式准确获得。
