【求助】化学发光剂ECL涂在膜上就能发光吗
2021-07-27
问题描述：
如题，我做WB最后ECL发光的时候每次都看不到发光，昨天看别的科室同学做的时候他们的竟然发光了，是不是说明我的ECL不行呢？
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coler2000
用户
ECL发光需要酶作用的
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笑红尘1982
用户如果目的条带表达很多,那是会有这种发光的情况出现的,如果你要检验你的ECL是不是好的,你可以直接搞个膜孵上二抗,不洗,在加上ECL,如果有就说明你的ECL好的,(前提条件是显影定影液是好的)
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lee800265
用户只有一句话，眼睛的灵敏度肯定不及X光胶片，所以看不见的不一定就没有发光，看不见的有可能是条带很细或者很弱，不明显，但是在胶片上可以反映，这至少你的背景很干净，但也可能是没有发光，也许是前面的步骤有问题。看见了如果是很亮的特异性条带则说明条带比较粗而且比较强，但也可能出现比较强的非特异性背景。评价WB发光的指标主要包括发光强度和持久度，1.强而持久则是最好的现象；2.强但很短暂说明二抗浓度大，需要稀释；3.弱但是可以持续发光就可能是上样量的问题或者是蛋白本身丰都的问题，如果不发光则很可能是很多原因造成的。鉴定发光试剂盒的标准步骤是混合ECL中的A、B液，然后加入1ul二抗，在暗室中观察如果发出蓝色的荧光则证明发光试剂盒和二抗均无问题。无需显影定影。
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mxm_sx
用户呵呵，别怕别怕，蛋白丰度有不同，实验条件不同，不同抗体也有不同，有时候没有看到的条带也是能压出来的哦举个例子，我做的其中一个蛋白，4，50分钟，还是很亮的，另外一种，同样的ECL量，就很弱很弱，呵呵至于你ECL检测，可以参照楼上那种方法，同时还能检测2抗好坏祝实验顺利
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