【求助】细胞裂解液加多少量？

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【求助】细胞裂解液加多少量？

2021-07-29

问题描述：

我是提细胞总蛋白的，6cmdish，我现在是用250ul裂解液的量，可是测出来的蛋白浓度比较低（1ug/ul），提细胞前在显微镜下看了细胞长满了，是不是我的裂解液量加的太多了，应该加多少量比较适合？请教。

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zhangjinbo0661

用户

【1】哈，可以把裂解液用量调整为50－100微升。【2】加入裂解液后可以加用超声破碎细胞。【3】提完细胞的器具可以在显微镜下看一下，剩余的细胞还多不多。如果还多，说明细胞提取的不彻底，还要改进方法，争取提取的细胞彻底一些。

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zebrafishtom

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一般推荐量是10cmdish/500ul.其他体系根据培养细胞表面积类推.如果细胞特殊,则量还需更改.

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dennistt

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加入裂解液时一般每10^6个细胞加入0.1ml裂解液。是如果此条件下最终提取物蛋白浓度应该不低于5mg/L。一般情况下，可参考下述的使用条件，但细胞数目会因细胞的大小而变动，对于特别大或特别小的细胞，需要自行计数，摸定条件。6孔板的单孔(1～2×10^6细胞)，加入0.1~0.2ml；25cm^2培养瓶(3～6×10^6细胞)，加入0.3~0.6ml；75cm^2培养瓶(1～2×10^7细胞)，加1~2ml。

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maxq301

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1、我的培养瓶是25的，每次用200μg的细胞裂解液，蛋白很浓2、建议用细胞刮刀，冰上裂解

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zhtwll2005

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谢谢大家的帮助！

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灰常感激撸主