新手求助：如何检测该调磷酸酶（calcineurin）的活性

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2021-08-02

问题描述：

我是新手，请问如何检测的活性。请各位大侠指导，谢了
我的邮箱：maoyuanqing@citiz.net

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任宝贝

用户

我也需要测细胞内调磷酸酶（calcineurin）的活性，不知道你是否已经做完了，麻烦回复一下，万分感谢！

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英国短毛猫

用户

您看此法可行不？用环孢菌素α（抑制NFATc1去磷酸化及核异位，但不抑制基因表达）处理细胞12h，提取胞浆部分裂解液，用NFATc1特异抗体进行免疫沉淀，提取物为a（磷酸化的NFATc1）。提取BPs处理和非处理全细胞裂解液（不用环保菌素α处理），用Calcineurin特异抗体进行免疫沉淀，提取物分别为b和c。取等量b和c分别与等量的a在37℃孵育4h，然后用磷酸化的PKA（蛋白激酶A）底物特异性抗体进行Westernblotting检测，分析ALN处理组和非处理组磷酸化NFATc1的差异，评价BPs对Calcineurin活性的影响

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