DNA纯化实验——PCR清洁试剂盒纯化法
实验方法原理 | |||||||||
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实验材料 | PCR产物 试剂、试剂盒 | PCR清洁试剂盒 仪器、耗材 | 96孔DNA制备板96孔深孔板96孔V型底板 实验步骤 | 一、试剂盒组成、贮存、稳定性 1. 说明书,耗材:96孔DNA制备板,96孔1.6ml深孔板,96孔V型底板。 2. BufferPCR-A:DNA结合溶液。室温密闭贮存。若出现沉淀,应于65°C温浴溶解并冷却至室温后再使用。 3. BufferW2concentrate:去盐液。使用前,根据瓶上指定的体积加入乙醇,混合均匀,室温密闭贮存。可用100%乙醇或95%无水乙醇。 4. Eluent:2.5mMTris-HCl,pH8.5。室温密闭贮存。 二、操作步骤 用户可以选择负压法或离心法。 A.负压法 1A. 正确连接负压装置,将96孔DNA制备板置于负压装置上;在PCR、酶切、酶标或测序反应液中,加3个体积的BufferPCR-A(若BufferPCR-A不足100μl,加至100μl);混合均匀后转移到96孔DNA制备板中,开启并调节负压至-25-30英寸汞柱,缓慢吸掉板中溶液。 2A. 加0.3mlBufferW2,吸尽管中溶液。以同样的方法再用0.3mlBufferW2洗涤两次。 *确认在BufferW2concentrate中已按试剂瓶上的指定体积加入无水乙醇。 3A. 保持负压将96孔DNA制备板抽吸10min。 4A. 导流管朝下将96孔DNA制备板于长纤维性纸巾上用力拍击6次。 5A. 将96孔DNA制备板置于96孔V型底板上,在膜正中央加25-30μl水或Eluent,室温静置1min。≥3000×g离心5min洗脱DNA。 B.离心法 1B. 在PCR、酶切、酶标或测序反应液中,加3个体积的BufferPCR-A(若BufferPCR-A不足100μl,加至100μl);混匀后,转移到96孔DNA制备板中,将96孔DNA制备板置于96孔1.6ml深孔板中,1000×g离心1min,弃滤液。 2B. 在96孔DNA制备板中,加0.3mlBufferW2,1000×g离心1min,弃滤液。以同样的方法再用0.3mlBufferW2洗涤一次。 *确认在BufferW2concentrate中已按试剂瓶上的指定体积加入无水乙醇。 3B. 将96孔DNA制备板置于96孔1.6ml深孔板中,≥3000×g离心10min。 4B. 将96孔DNA制备板置于洁净的96孔V型底板中,在膜正中央加25-30μl水或Eluent,室温静置1min。≥3000×g离心5min洗脱DNA。 注意事项 | 1. 将洗脱液或水加热至65°C,有利于提高洗脱效率。 2. DNA分子呈酸性,建议在2.5mMTris-HCl,pH8.5洗脱液中保存。 |
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发布于 : 2021-07-24
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