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DNA纯化实验——PCR清洁试剂盒纯化法
来自 : 蚂蚁淘
实验方法原理
硅胶膜可在高盐条件下结合DNA,又可在低盐条件下与DNA分离。用于清洁目的的含DNA溶液中的引物、单核苷酸、酶、矿物油、盐离子等杂质因为没有与DNA相似的特性,所以被分离开来。
 
实验材料
试剂、试剂盒
仪器、耗材
实验步骤
一、试剂盒组成、贮存、稳定性
 
1. 说明书,耗材:96孔DNA制备板,96孔1.6ml深孔板,96孔V型底板。
 
2. BufferPCR-A:DNA结合溶液。室温密闭贮存。若出现沉淀,应于65°C温浴溶解并冷却至室温后再使用。
 
3. BufferW2concentrate:去盐液。使用前,根据瓶上指定的体积加入乙醇,混合均匀,室温密闭贮存。可用100%乙醇或95%无水乙醇。
 
4. Eluent:2.5mMTris-HCl,pH8.5。室温密闭贮存。
 
二、操作步骤
 
用户可以选择负压法或离心法。
 
A.负压法
 
1A. 正确连接负压装置,将96孔DNA制备板置于负压装置上;在PCR、酶切、酶标或测序反应液中,加3个体积的BufferPCR-A(若BufferPCR-A不足100μl,加至100μl);混合均匀后转移到96孔DNA制备板中,开启并调节负压至-25-30英寸汞柱,缓慢吸掉板中溶液。
 
2A. 加0.3mlBufferW2,吸尽管中溶液。以同样的方法再用0.3mlBufferW2洗涤两次。
 
*确认在BufferW2concentrate中已按试剂瓶上的指定体积加入无水乙醇。
 
3A. 保持负压将96孔DNA制备板抽吸10min。
 
4A. 导流管朝下将96孔DNA制备板于长纤维性纸巾上用力拍击6次。
 
5A. 将96孔DNA制备板置于96孔V型底板上,在膜正中央加25-30μl水或Eluent,室温静置1min。≥3000×g离心5min洗脱DNA。
 
B.离心法
 
1B. 在PCR、酶切、酶标或测序反应液中,加3个体积的BufferPCR-A(若BufferPCR-A不足100μl,加至100μl);混匀后,转移到96孔DNA制备板中,将96孔DNA制备板置于96孔1.6ml深孔板中,1000×g离心1min,弃滤液。
 
2B. 在96孔DNA制备板中,加0.3mlBufferW2,1000×g离心1min,弃滤液。以同样的方法再用0.3mlBufferW2洗涤一次。
 
*确认在BufferW2concentrate中已按试剂瓶上的指定体积加入无水乙醇。
 
3B. 将96孔DNA制备板置于96孔1.6ml深孔板中,≥3000×g离心10min。
 
4B. 将96孔DNA制备板置于洁净的96孔V型底板中,在膜正中央加25-30μl水或Eluent,室温静置1min。≥3000×g离心5min洗脱DNA。
注意事项
1. 将洗脱液或水加热至65°C,有利于提高洗脱效率。
 
2. DNA分子呈酸性,建议在2.5mMTris-HCl,pH8.5洗脱液中保存。
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