实验试剂
1.10%中性福尔马林(pH6.8~7.1)甲醛10ml蒸馏水90ml醋酸钠2g
2.酸性磷酸酶作用液
蒸馏水90ml0.2mol/L醋酸缓冲液(pH4.6)12ml5%硝酸铅2ml
3.2%β—甘油磷酸钠4ml
先将蒸馏水和醋酸缓冲液混合,随后分成大致相等的两份,一份中加硝酸铅溶液,另一份加甘油磷酸钠溶液,然后再将两者缓缓混合,边混边搅匀后若酸碱度值不到pH5.0,可加少量醋酸的调整。此作用液zui好在临用前配制,不能贮存。配好后的作用液应透明无絮状悬浮物和沉淀,否则将严重影响实验结果。
4.1%硫化胺溶液
硫化胺1ml蒸馏水9ml
5.姬姆萨染液(1:30)
姬姆萨原液3滴磷酸盐缓冲液(pH6.8)5ml
6.6%淀粉肉汤
牛肉膏0.3g蛋白胨1.0g氯化钠0.5g蒸馏水100ml
高压灭菌9.9×104pa(15磅)20min,再加入可溶性淀粉6g,水温浴,促使溶解后置冰箱保存备用。
实验步骤
1.取小白鼠一只,每日腹腔注射6%淀粉肉汤1ml,连续注射三天。
2.在第三天注射后3~4h,再向腹腔注射生盐水1ml,过3min后在原注射部位抽取腹腔液0.1~0.2ml。请注意!注射和抽液的进针部位和深度要保持一致。否则可能抽不出腹腔液。
3.将腹腔液滴在预冷的载玻片上,每片1~2滴,涂片,将玻片垂直插入玻片架,迅速放到冰箱内(4℃),让细胞自行铺展。
4.30min后,将玻片转入10%中性福尔马林,冰箱内4℃固定30min。
5.自来水漂洗5min,把水甩干。
6.转入酸性磷酸酶作用液中,37℃处理30min。
7.自来水漂洗片刻。
8.1%硫化胺处理3~5min。
9.自来水冲洗,甩干。
10.用1∶30的姬姆萨染液染色15min。
11.自来水冲去染液,用磷酸盐缓冲液临时封片,镜检。
12.对照实验:
将第3步的腹腔液涂片置50℃温箱中处理30min,使酶失活,再进行6~11步的同样实验。
