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预实验：
- Cas9导入细胞方法：尝试各种方法，如脂质体类转染、电转、慢病毒感染、腺病毒感染等，确定高效导入Cas9方法。
- 药物浓度预实验：降低后续阳性克隆筛选和检测工作难度。
- 单克隆培养情况：观察细胞是否可以单克隆培养。
基因敲除（敲入）：
- 靶点设计
- 3个靶点，靶点位置尽量在基因CDS的前1/3，ATG之后，最好能破坏重要的domain和所有的转录产物isoform。第一批合成构建3个，效果不佳或时间紧张的可一次构建6个。
- 载体构建和病毒包装
- 内源活性筛选
- Donor载体(基因敲入)
- 单克隆筛选
- 获得突变型
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发布于 ： 2021-08-17
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