上个世纪80年代,随着基因重组技术的不断完善和小鼠胚胎干细胞(ES)体外培养技术的成熟,基于同源重组的ES打靶得以建立。ES打靶基因敲除技术修饰准确、效果稳定、成功率极高,一直被认为是对模式动物进行特定基因修饰的金标准。但由于嵌合体阳性率低,且必须与工具鼠交配才能获得删除Neo的杂合子,使得构建周期长达12-16个月。
20世纪初,核酸酶基因编辑技术(TALEN、CRISPR/Cas9)出现,其周期短(6~8个月)、无物种限制等优势迅速受到广大科研学者的青睐。但由于脱靶效应至今无法避免,也无法胜任复杂的基因敲除,因此传统ES打靶技术仍是首选。
那么,如何在保持传统ES打靶优势的基础上优化其构建流程呢?赛业TurboKnockout®基因敲除技术应运而生。TurboKnockout®基因敲除通过跨越ES打靶「嵌合体阳性率低」阶段并真正实现自删除Neo,从而减少两代繁育时间,使ES打靶缩短至6~8个月。在核酸酶技术尚未成熟之前,TurboKnockout®将是研究者的最佳选择。
技术对比:
技术原理:
1、跨越「嵌合体」阶段:
基于ES打靶的TurboKnockout®采用了独特建系的具有高效遗传优势的ES细胞系(实验数据表明,在获得100%雄性嵌合体小鼠方面,TurboKnockout®ES细胞系是对照传统ES细胞系的三倍以上),通过特定胚胎发育阶段的显微注射,使TurboKnockout®ES细胞100%代替内源ES细胞,从而实现跨越「嵌合体」阶段。
2、实现自删除Neo:
TurboKnockout®采用独特的Self-deletingNeoCassette所获得的嵌合体,在与任何品系的小鼠交配均可百分百自删除Neo。也就是说,TurboKnockout®不仅仅实现跨越「嵌合体」阶段,还能真正自删除Neo从而快速获得去Neo的杂合子小鼠。
技术优势:
●基因修饰准确、效果稳定;
● 没有脱靶效应,可胜任复杂的基因敲除;
● 自删除Neo可进一步缩短服务周期,简化了小鼠交配流程。
服务流程对比:
因此,与传统ES打靶相比,赛业生物革命性的TurboKnockout®基因敲除能直接减少两代繁育时间,缩短ES打靶至6~8个月。在核酸酶技术(TALEN/CRISPR)尚未成熟之前,TurboKnockout®将是研究者的最佳选择。