人骨髓间充质干细胞向成骨细胞的诱导分化
Lipofectamine2000
Description
用的也是LIPOFECTAMINE2000，每次都是一次成功。有以下几个建议：
1.细胞的状态。这点非常重要，不要急于求成，一定要让细胞处于最佳的生长状态再做。个人觉得细胞复苏后的3代左右细胞状态最好，不要用传了很多代的细胞去做，细胞的形态都会发生变化了。2.细胞的融合度。说明书上写的细胞的融合度要达到90%才能做啊，你的才70%，细胞太少，肯定容易死的。我的接种密度是3~4*105/ml.3.无血清培养基OPTI-MEM（GIBICO）很好用，有无血清培养基的话，就用它代替PBS洗细胞两遍。注意洗的时候要轻，靠边缘加入液体，然后不要吹吸细胞，而是转动培养板让液体滚动在细胞表面。如果洗的太厉害，细胞又损失一部分，当然加了脂质体，细胞受影响就更大了。4.加入无血清培养基后5~6小时更换全培养基。18小时毒性时间太长了！5.转染的质粒一定纯度好、浓度高、无内毒素。浓度不要低于0.35ug/ul。不知道你用的是不是invitrogen的LIPOFECTAMINE2000，感觉你的方法无论是几孔板的体系都跟我的一点都不一样啊！以下是以6孔板为例说明一下我的体系吧！溶液1：240ul无血清培养基+10ullipofectamine2000perwell（总体积250ul）（温育5min）溶液2：Xul无血清培养基+4ug质粒perwell（总体积250ul）将溶液1与溶液2混合，室温下置20min。无血清培养基冲洗细胞两遍后加入2ml无血清培养基。将溶液1与溶液2的混合液逐滴加入孔中，摇动培养板，轻轻混匀。在37℃，5％的CO2中保温24-72小时。个人经验：48小时mRNA表达最高；72h蛋白表达最高。
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发布于 ： 2021-08-22
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