酒精氧化酶活性测定方法
2017-03-06
问题描述：
同题，请大神指正
1.反应混合液
15mM4-AA溶液0.10ml
0.2%（w/v）苯酚溶液0.10ml
2.0M甲醇溶液0.25ml
50U/mlPOD溶溶液0.10ml
超纯水0.25ml
备注：
*50U/mlPOD溶液：将500U的POD溶于10ml超纯水中并混匀。
2.反应终止液
无水乙醇
3.酶稀释缓冲液
10mMTris-HCl缓冲液pH=8.0
4.说明
（1）4-AA：4-氨基安替比林
（2）POD：辣根过氧化物酶
5.过程
精确称量约20mg样品，加酶稀释缓冲液至总量为20ml，用酶稀释缓冲液稀释，根据需要调节浓度（χ，χ≤0.04mg/ml）
6.实验
1.准确地吸取1.0ml反应混合液到小试管中后，在37℃预孵育。
2.5分钟后，加入50μL酶溶液，并在37℃混合开始反应。在空白对照中，加入50μL酶稀释缓冲液代替酶溶液。
3.在反应开始5分钟后，加入2.0ml反应终止液以终止反应。
4.测量480nm处的吸光度。
吸光度样本溶液：As
空白对照：Ab
△A=（As-Ab）≤0.20Abs
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