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植物材料 用最精确的方法，称取不超过100mg的植物材料，置于处理过的研钵，加入液氮进行研磨 将研磨得到的粉末，快速转移至无RNase，并经过液氮冷却的2mL离心管(自备)，注意材料要保持冷冻状态 加入450µL Buffer RLT（1mL 加入10μL β-巯基...

提取总RNA的方法现在主要的就是用商用试剂盒，比如凯杰，欧米伽等厂家，还有就是用传统的酚氯仿，trizol提取，一般trizol提取的质量相对比较好，但是操作起来比较麻烦，全程冰上操作，包括离心，这要看你们实验室有没有相应的试剂或仪器了，如果用商用试剂盒的话，通常是针对比较特殊的要求的样本的，比如石蜡样本，植物样本等，你需要根据你的样本类型选择不同的试剂，你可以咨询一下凯杰生物的技术支持

艾思进三种试剂盒中的一个，就这三种试剂盒，比较可以的。

Thermo 反转录试剂盒K1622使用说明Thermo Scientific RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit是一套用于以RNA为模板高效合成第一链cDNA的完整系统，可合成长达13kb的cDNA。试剂盒配套提供的RiboLockRNase Inhibitor，可有效防止RNA模板的降解。试剂盒配套提供oligo(dT)18引物和随机六聚体引物。oligo(dT)18引物可以选择性地 与mRNA中的poly (A)尾结合。随机六聚体引物无需poly (A)尾，因此可转录mRNA 5’-端区域，也可以无poly (A)尾的RNA (如micoRNA)为模板合成cDNA。该试剂盒也可使用基因特异性引物。Thermo 反转录试剂盒K1622使用说明优点：• 合成全长的第一链cDNA，最长可合成13kb的cDNA• 最佳反应温度为42℃• 完全一提供RT反应所需的所有组分应用:• 第一链cDNA合成，作为RT-PCR和实时RT-qPCR的模板• 构建全长cDNA文库• 反义RNA合成Thermo 反转录试剂盒K1622使用说明RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit合成全长cDNA1 μg小鼠心脏总RNA作为模板，用oligo(dT)18 引物进行逆转录反应。由此合成的cDNA，再作为Taq DNA Polymerase后续PCR扩增的模板。末端2024 bp片段的成功扩增，表明长度为13.8 kb的全长RN***段得到成功的逆转录。

对于多个分子生物学和基因组学应用，从克隆和PCR到基因组测序和芯片分析，DNA纯化都是必经之路。然而，选择最佳的纯化试剂盒却并非易事。例如，在您纯化基因组DNA时，您需要一个试剂盒，能温和地处理核酸，同时又不分离质粒DNA。而且，新一代测序技术对样品的要求颇高，我们也需要一些专门的产品来纯化DNA。在此，我们介绍一些新选择。盐沉淀方法Epicentre（Illumina旗下公司）的MasterPure™CompleteDNAPurificationKit采用一种专利的盐沉淀方法。这一系列试剂盒覆盖各种样品类型，包括血液、固定组织、植物、酵母、昆虫等，在短短30分钟内可带来高产量的核酸，而损失极少。据Epicentre的资深产品经理CristineKinross介绍，有了这些试剂盒，用户在测序或其他分子生物学应用的样品制备之前无需再进行额外的纯化。它们可去除蛋白及其他细胞碎片，而不引入那些必须去除的毒性化合物，从而避免了多次洗涤，并改善核酸产量。Kinross谈道：“利用MasterPure回收核酸的出色纯度让样品可直接进入测序文库的制备。”当然，对于其他应用，包括芯片、qPCR和克隆，它也是适合的。此外，这个试剂盒也能用于RNA的纯化。在获得总的核酸后，经过DNase处理，就能得到总RNA。多种试剂盒Promega提供广泛的核酸纯化试剂盒，采用几种不同的策略。例如，Wizard®GenomicDNAPurificationKit是基于经典的沉淀法，可从全血、组织培养细胞、动物及植物组织、酵母和细菌中提取基因组DNA，灵活高效；而ReliaPrep™系列试剂盒采用柱提法，简单快速。此外，Promega还提供基于磁珠纯化的试剂盒。Promega公司基因组学的全球产品经理EricVincent表示：“尽管溶液的确切组分会有不同，但裂解、结合、洗涤和洗脱的基本过程适用于不同的结合方法（如硅胶或纤维素），不同的纯化形式（纯化柱或磁珠），以及手动和自动纯化操作。”对于一些非常重要的样品类型（如FFPE样品），还需要一些专门的操作或处理。“我们开发了独特的结合/洗涤缓冲液，它们能有效去除抑制下游反应的物质，而优化的系统让研究人员能够捕获少量的核酸并以小体积（不到30μl）洗脱，我们还开发出自动化的解决方案，适合各种试剂和通量，”Vincent说。这些试剂盒提供了完整的解决方案，能够以极小的体积洗脱核酸，同时又避免抑制剂残留在洗脱液中。经过这些试剂盒纯化后，核酸可用于PCR、Sanger测序、新一代测序、芯片等下游分析。经典的硅胶膜QIAGEN的核酸纯化试剂盒依赖DNA与纯化柱上的硅胶膜结合。抑制剂被洗掉，而完整的DNA随后从柱上洗脱，产量高，纯度高，带来更高质量的新一代测序文库。MarcoPolidori-QIAGEN样本制备的全球产品经理-认为，在处理极少量的样品或困难的样品如FFPE时，高产量就变得格外关键。FFPE样品所产生的DNA可能会出现“随机胞嘧啶脱氨”事件，这会导致人为的单核苷酸多态性（SNP）。不过，QIAGEN的GeneReadDNAFFPEKit能够去除脱氨的胞嘧啶，避免在NGS实验中产生错误的结果。此产品尚未正式推出，若有兴趣试用，可填写资料。“我们的大部分试剂盒都已在NGS应用中得以证明，从循环肿瘤DNA的全基因组测序到微生物组，”Polidori谈道。这些试剂盒能让用户从各种样品中获得高质量的DNA，避免FFPE样品出现C-T的假象，并在很短的时间内带来高分子量的DNA。MagAttractHMWDNAkit就能够利用简单的磁珠操作，实现100-200kbDNA的纯化。整个纯化过程温和去除污染物及抑制剂，并具有极高的产量和纯度。离液盐Sigma-Aldrich公司提供GenElute™MammalianGenomicDNAPurificationKit，这是基于离液盐试剂的产品。在含有离液盐的溶液中，样品被裂解，以确保大分子的彻底变性。添加乙醇，让DNA与硅胶膜结合。污染物被洗掉，而DNA被洗脱在Tris缓冲液中。通过专为分离基因组DNA而选择的硅胶膜，此试剂盒让用户能够从各种样品中纯化高质量的DNA，包括培养的细胞、组织（包括鼠尾）、新鲜的全血或白细胞。据介绍，此试剂盒综合了硅胶膜结合和微量离心形式的好处，避免了昂贵的树脂、乙醇沉淀以及有害的有机物，如苯酚、氯仿。更重要的是，它纯化所得的DNA可应用于限制性内切酶消化、PCR、Southernblot、测序等。（作者：JamesNetterwald/生物通编译）

是否需要纯化，还需进一步检测才能确定
1、测浓度和纯度，是否达标
2、跑电泳看条带是否与测的数据相互印证
如果上述两点满足，就不需要纯化，否则需要进一步纯化。
不过根据经验，一般都不需要，我们实验室用的是GNT系列的试剂盒，提取结果就直接进入下游实验了，效果挺稳定
质粒是真核细胞细胞核外或原核生物拟核区外能够进行自主复制的遗传单位,包括真核生物的细胞器（主要指线粒体和叶绿体）中和细菌细胞拟核区以外的环状脱氧核糖核酸(DNA)分子.现在习惯上用来专指细菌(大肠杆菌）、酵母菌和放线菌等生物中细胞核或拟核中的DNA以外的DNA分子.
小鼠没有叶绿体,你可以直接参照小鼠线粒体的提取方法进行提取.

我们有直接qPCR试剂盒，组织样品经试剂盒里2种试剂处理10或15分钟就可以做qPCR，实现基因分型。

RNase指需要加在solution 1里面,就是悬浮菌液的那种液体.裂解液2和酸性溶液3不用加. 不同的盒子加的量多少是不一样的,其实多加点少加点关系也不大.

有人用天根的植物RNA提取试剂盒提取过RNA
提RNA一般注意：提取前材料的保存（新鲜材料,过夜处理的样品）,提取中对外源性的RNA酶的清除控制（离心管,PCR管,电泳槽,台面等的无RNA酶化处理）,提取后需要-80度保存.其次跑电泳时,注意电泳液最好用新鲜的,核酸染料等诸多因素.
细菌总RNA提取试剂盒（ germs islation kit).
对于外源性RNA酶的控制外源RNA酶清除剂,避免使用致癌物DEPC的危险方法就可简单操作清除耗材,台面,仪器等的外源RNA酶的降解作用.

TRNA保存于－20度（未加DEPC－H2o），安全吗、？可以保存多长时间？

看实验目的，如果是做基因克隆之类、定量PCR什么的，RNA、DNA都必须要分开提，如果只是定性看看，可以在一起提。如果样本不是太难得，还是分开提去比较好本数据来源于百度地图，最终结果以百度地图最新数据为准。

一般都是无色透明的，因为最后溶解的时候主要是用DEPC水等溶液，如果提取出来的溶液显其他颜色比如黄色，可能是提取过程中没有去除好上清液，或者是有PCR抑制剂，主要看你提取的是什么物种，用什么提取方法或试剂盒