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| GSK-3β Inhibitor IIGSK-3β inhibitor |
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
Nature.2017 Jan 19;541(7637):417-420.
Nature.2018 Nov;563(7731):407-411.Nature.2018 Jun 13.Nature.2018 Jun 27.Nature.2018 Mar 29;555(7698):673-677.Nature.2017 Sep 7;549(7670):96-100.Nature.2016 Apr 21;532(7599):398-401.
Science.2016 Aug 5;353(6299)594-8Nat Nanotechnol.2017 Dec;12(12):1190-1198.Nature Biotechnology.2017 Jun;35(6):569-576Nat Med.2018 Sep 17.Cell.2018 Dec 21. pii: S0092-8674(18)31561-7.Cell.Available online 25 October 2018.Cell.2018 Sep 27. pii: S0092-8674(18)31183-8.Cell.2018 Jun 28;174(1):172-186.e21.Cell.2018 Feb 22;172(5):1007-1021.e17.Cell.2017 Nov 30;171(6):1284-1300.e21.Cell.2017 Aug 17. pii: S0092-8674(17)30869-3.Cell.2017 Jul 13;170(2):312-323Nat Med.2018 Jan 29.Nat Med.2017 Nov;23(11):1342-1351.Cell.2017 Apr 6;169(2):286-300.Cell.2015 Aug 27;162(5):987-1002.Cell.2015 Feb 12;160(4):729-44.Nature Medicine.2017 Apr;23(4):493-500.Cancer Cell.2018 May 14;33(5):905-921.e5.Cancer Cell.2018 Apr 9;33(4):752-769.e8.Cancer Cell.2018 Mar 12;33(3):401-416.e8.Cancer Cell.2017 Aug 14;32(2):253-267.e5.Nat Methods.2018 Jul;15(7):523-526.Cell Stem Cell.2018 May 3;22(5):769-778.e4.Cell Stem Cell.2017 Nov 20. pii: S1934-5909(17)30375-2.Quality Control & MSDS
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- COA (Certificate Of Analysis)
- MSDS (Material Safety Data Sheet)
Chemical structure
GSK-3β Inhibitor II Dilution Calculator
calculate
GSK-3β Inhibitor II Molarity Calculator
calculate
| Cas No. | 478482-75-6 | SDF | Download SDF |
| Synonyms | Tip-oxadiazole | ||
| Chemical Name | 4-[5-[[(3-iodophenyl)methyl]thio]-1,3,4-oxadiazol-2-yl]-pyridine | ||
| Canonical SMILES | IC1=CC(CSC2=NN=C(C3=CC=NC=C3)O2)=CC=C1 | ||
| Formula | C14H10IN3OS | M.Wt | 395.2 |
| Solubility | ≤3mg/ml in DMSO;10mg/ml in dimethyl formamide | Storage | Store at -20°C |
| Physical Appearance | A crystalline solid | Shipping Condition | Evaluation sample solution : ship with blue ice.All other available size:ship with RT , or blue ice upon request |
| General tips | For obtaining a higher solubility , please warm the tube at 37 ℃ and shake it in the ultrasonic bath for a while.Stock solution can be stored below -20℃ for several months. | ||
IC50: 390 nM for GSK-3β
GSK-3β Inhibitor II is a GSK-3β inhibitor.
Glycogen Synthase Kinase-3 (GSK-3), a protein-serine kinase, is implicated in the hormonal control of various regulatory proteins. A number of substrates have been identified, which implicates GSK-3 in the regulation of several physiological processes. Moreover, it has been reported that compounds that specifically inhibit GSK-3 activity may be useful in the treatment of diabetes.
In vitro: In a previous study, by using a virtual screening strategy based on a methodology derived from the CATS molecular descriptor, a novel compound class including GSK-3β Inhibitor II with inhibitory activity against the GSK-3 enzyme was identified via scaffold hopping. GSK-3β Inhibitor II was found to be a potent inhibitor of GSK-3β with the IC50 value of 390 nM. However, GSK-3β Inhibitor II was not able to inhibit another GSK-3 isoform, GSK-3α [1]. Another study found that GSK-3β Inhibitor II could block the functional regulation of p53 through inhibiting GSK-3β, decreasing MDM2 levels, and modulating mitochondrial p53 apoptotic signaling [2].
In vivo: Up to now, there is no animal in vivo data reported.
Clinical trial: So far, no clinical study has been conducted.
References:[1] Naerum, L. ,Nrskov-Lauritsen, L. and Olesen, P.H. Scaffold hopping and optimization towards libraries of glycogen synthase kinase-3 inhibitors. Bioorg.Med.Chem.Lett. 12(11), 1525-1528 (2002).[2] Watcharasit, P. ,Bijur, G.N.,Song, L., et al. Glycogen synthase kinase-3beta (GSK3beta) binds to and promotes the actions of p53. J.Biol.Chem. 278(49), 49972-48879 (2003).
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2021-09-07
实验室有毒常用药品0.溴化乙锭（EB）：大家都比较熟悉了。具有强诱变致癌性，使用时一定要戴一次性手套，注意操作规范，不要随便触摸别的物品。1.DEPC(焦碳酸二乙酯):闻起来香香甜甜的,可是害人不眨眼!一种强有力的蛋白质变性剂,而且怀疑是致癌剂.开瓶时将瓶子远离你,内压可导致溅泼.操作时戴合适 查看更多
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2021-09-02
2.1 美蓝染色法2.1.1 吕氏碱性美蓝染色液美蓝 0.3g95%乙醇 30mL0.01%氢氧化钾溶液 100mL将美蓝溶解于乙醇中，然后与氢氧化钾溶液混合。2.1.2 染色法将涂片在火焰上固定，待冷。滴加染液，染1～3min，水洗，待干，镜检。2.1.3 结果菌体呈蓝色 查看更多
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2021-08-18
TE 1x, 10xSTE 1x, 10xSSC 20xElectrophoresis buffers.TAE 50xTBE 10xFGRB 50xGTGB 20xTGB 5xLoading buffer 10xPEG-NaClBacteriophage lambda buffersSMSTMTMDenaturati 查看更多
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2021-08-25
Always to try to prepare buffer solution at the temperature and concentration before planing to use during the experiment. Stock solutions are acceptable as lo 查看更多
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2021-09-13
一、非特异性染色的主要因素 组织的非特异性染色的机理很复杂，其产生的原因主要可分为以下几点： （1）一部分荧光素未与蛋白质结合，形成了聚合物和衍化物，而不能被透析除去。 （2）抗体以外的血清蛋白与荧光素结合形成荧光素脲蛋白，可与组织成分结合。 （3）除去检查的抗原 查看更多
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2021-09-07
Lysis Buffer Proteinase K25 ml 1M Tris pH 8.0 (FC 50mM) 100 mg dry Proteinase K (Sigma #2308)50 ml 0.25M EDTA (FC 25 mM) 4.75 查看更多
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2021-08-29
一、实验目的 了解培养基的配制原理；掌握配制培养基的一般方法和步骤；了解常见灭菌、清毒基本原理及方法；掌握干热天菌、高压蒸汽灭菌及过滤除菌的操作方法。 二、实验原理 培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物。培养基的原材料可分为碳 查看更多
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2020-08-21
深圳市时得佳科技有限公司南方标准品网在发布的中检所含量测定用对照品,中检所对照品,中检所对照品产品目录,中检所标准品供应信息，浏览与中检所含量测定用对照品,中检所对照品,中检所对照品产品目录,中检所标准品相关的产品或在搜索更多与中检所含量测定用对照品,中检所对照品,中检所对照品产品目录,中检所标准品相关的内容。 查看更多
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2021-08-23
Fixation and permeabilization protocol 5/30/91 Mike FinneyThis protocol works for all stages except dauers (which won"t open) andhypoclorite-treated eggs (whic 查看更多
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2021-08-24
Discoverx中国代理 询价 Ciprofibrate ￥100 Pierce中国代理 询价 Baccatin III ￥100 AccuCount Fluorescent Particles, Nile Red, 20um (+/-2um), 5x10... 查看更多
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2019-03-22
青岛捷世康生物科技有限公司在发布的苯甲酸(65-85-0)中药标准品供应信息，浏览与苯甲酸(65-85-0)中药标准品相关的产品或在搜索更多与苯甲酸(65-85-0)中药标准品相关的内容。 查看更多
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2021-08-15
METHOD 1:Formaldehyde preservative – 2% formaldehyde solution in protein-free phosphate-buffered saline (PBS).Prepare as follows:Add 2 g paraformaldehyde powde 查看更多
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求助:关于生化方法学验证的准确度,哪里可以买到标准品? 临床检验...123
tcxsz2016-07-26
打算用新牌子的生化试剂，领导要求做方法学验证，验证要求嘛无非就是准确度、批内批间精密度、最低检测限、线性范围这些。准确度验证时需要用到标准物质，在中国计量科学研究院官网上找，好多都没有，比如酶类、胆......
手把手教你荧光定量PCR(一)123
xuef_qi2021-08-07
我是定量PCR的新手，有很多问题要请教大家。
我做的病毒的普通PCR结果还可以。我现在要做该病毒的定量。用的是ICycler定量PCR仪器。有那位高手能告诉我怎样操作该仪器。
我还要重新设计目的基因片段的因物吗？如果不用重新设计，那我下一步应该为做定量PCR做哪些准备呐？还需要设计参照模板吗？
这种实验的把握性有多大？
大家有什么更好的建议吗？
我做的病毒的普通PCR结果还可以。我现在要做该病毒的定量。用的是ICycler定量PCR仪器。有那位高手能告诉我怎样操作该仪器。
我还要重新设计目的基因片段的因物吗？如果不用重新设计，那我下一步应该为做定量PCR做哪些准备呐？还需要设计参照模板吗？
这种实验的把握性有多大？
大家有什么更好的建议吗？
分子生物学常用荧光核酸染料123
2021-08-06
荧光染料是研究生物学围观世界特别是核酸时最常用的示踪工具之一，楼主想要详细的了解的话，可以去专业的网站上面找找看，有空的话可以去生物帮那里查看一下。我比较喜欢去那里查找资料的。这个网站蛮专业的。我记得上面有一个介绍了分子生物学实验和细胞学实验中常用的荧光染料文档，还对荧光染料的使用提出了自己的看法。你可以参考一下啊。有时间就去那儿上面（ YINGG.www.bio1000.com/ ）找找看啊，希望可以帮到你啊
【共享】对照品和标准品的概念 制剂技术讨论版论坛123
pitanco2005-05-18
对照品和标准品的概念
经常对对照品与标准品的概念不清楚，有何区别，查了一下，得到如下结果：
对照品系指用于鉴别、检查、含量测定和校正检定仪器性能的标准物质，而标准品系指用于生物检定、抗生素或生物药品中含量或效价测定的标准物质，以效价单位(U)表示。
还是感觉不甚明了，是否标准品只用于生物方面？是否化学方面只能称对照品？标准品有什么要求？对照品有什么要求？
[url]http://www.cdda.gov.cn/index/zcfg_detail.asp?ID=62a[/url]
国家药品标准品、对照品系指国家药品标准中用于鉴别、检查、含量测定、杂质和有关物质检查等标准物质，它是国家药品标准不可分割的组成部分。国家药品标准物质是国家药品标准的物质基础，它是用来检查药品质量的一种特殊的专用量具；是测量药品质量的基准；也是做为校正测试仪器与方法的物质标准；在药品检验中，它是确定药品真伪优劣的对照，是控制药品质量必不可少的工具。
目前，中国药品生物制品检定所已能提供各类国家标准物质1242种，其中中药化学对照品288种，对照药材400种，两者占总数的一半以上，
http://www.chp.org.cn/2005gs/swfl/swfl.htm
国家标准品及生物参考品系指用于鉴别、检查含量或效价测定的标准物质，其制备与标定应符合“生物制品国家标准物质制备和标定规程”要求，并由国务院药品监督管理部门指定的机构分发。企业工作标准品或参考品必须经国家标准品或参考品标化后方能使用。
对照品系指用于生物制品理化等方面测定的特定物质，由生产单位采用与制品生产工艺相同的方法制备。对照品应尽可能与制品原液配方一致，稳定性较差的，可加不含对测定有干扰物质的适宜的稳定剂。对照品由国家药品检定机构审查认可，其标准应不低于制品的质量标准。
From:[url]http://www.pharm.sdu.edu.cn/peiyang/jiaoan/yaowufenxihx.doc[/url]
（3）标准品、对照品：是指用于鉴别、检查、含量测定的标准物质，均由国务院药品监督管理部门指定的单位制备、标定和供应。标准品系指用于生物测定、抗生素或生化药品中含量或效价测定的标准物质，一国际标准品进行标定；对照品出另有规定外，按干燥进行计算后使用。
标准品和对照品均附有使用说明书，质量要求，有效期和装量等。
From:[url]http://www.chp.org.cn/2005gs/swfl/swbz.htm[/url]
1定义
生物制品标准物质系指用于生物制品效价、活性或含量测定的或其特性鉴别、检查的生物标准品或生物参考物质。
2标准物质的种类
生物制品标准物质分为二类。
国家生物标准品系指用国际标准品标定的，或我国自行研制的(尚无国际生物标准品者)用于定量测定某一制品效价或毒性的标准物质，其生物活性以国际单位（IU）或以单位（U）表示。
国家生物参考品系指用国际参考品标定的，或我国自行研制的(尚无国际参考品者)用于微生物(或其产物)的定性鉴定或疾病诊断的生物试剂、生物材料或特异性抗血清；或指用于定量检测某些制品的生物效价的参考物质，如用于麻疹活疫苗滴度或类毒素絮状单位测定的参考品，其效价以特定活性单位表示，不以（IU）表示。
From:[url]http://www.proteomics.com.cn/msl/papers/Notice1.html[/url]
1 对照品与标准品概念不清
对照品与标准品是2个不同的概念，中国药典凡例中已有明确的定义：对照品系指用于鉴别、检查、含量测定和校正检定仪器性能的标准物质，而标准品系指用于生物检定、抗生素或生物药品中含量或效价测定的标准物质，以效价单位(U)表示。文献中常将2种概念混淆，认为对照品就是标准品，是1种物质2种提法而已［1，2］，造成错误的原因，可能是有的药品既有对照品，又有标准品。例如，当用微生物法测定头孢克罗效价时，用头孢克罗标准品，用HPLC或UV法测定时，则用对照品；非那西丁当用作熔点校准物质时，用熔点标准品，测定含量时，用对照品。即使是同一种物质的标准品和对照品，它们的规格、标定方法以及用途都可能是不同的。
2 对照品或标准品混用
对照品或标准品混用，即将对照品或标准品用于不是其标定方法的含量测定，是药品检验中经常出现但未引起重视的一个问题［3］。尽管同一批对照品不同标定方法的含量有很好的相关性，但并不完全相同，有时差别会很大。如英国Glaxo公司提供的头孢呋肟酯对照品，HPLC标定为96.9%，供含量测定用；UV为98.8%，供溶出度测定。虽然中国药典凡例明确规定卫生部所发对照品仅用于正文中所规定的分析方法。但由于：(1)卫生部提供的对照品使用说明书不够详尽，大多无对照品质量要求及标定方法；(2)对对照品或标准品的正确使用缺乏认识；(3)日常科研中极难找到相应的对照品；(4)中国药典正文中也常存在对照品混用的问题，如常将含量测定用的标准品或对照品用于溶出度检查，而含量测定方法与溶出度分析方法又不同，故极易引起混用。
经常对对照品与标准品的概念不清楚，有何区别，查了一下，得到如下结果：
对照品系指用于鉴别、检查、含量测定和校正检定仪器性能的标准物质，而标准品系指用于生物检定、抗生素或生物药品中含量或效价测定的标准物质，以效价单位(U)表示。
还是感觉不甚明了，是否标准品只用于生物方面？是否化学方面只能称对照品？标准品有什么要求？对照品有什么要求？
[url]http://www.cdda.gov.cn/index/zcfg_detail.asp?ID=62a[/url]
国家药品标准品、对照品系指国家药品标准中用于鉴别、检查、含量测定、杂质和有关物质检查等标准物质，它是国家药品标准不可分割的组成部分。国家药品标准物质是国家药品标准的物质基础，它是用来检查药品质量的一种特殊的专用量具；是测量药品质量的基准；也是做为校正测试仪器与方法的物质标准；在药品检验中，它是确定药品真伪优劣的对照，是控制药品质量必不可少的工具。
目前，中国药品生物制品检定所已能提供各类国家标准物质1242种，其中中药化学对照品288种，对照药材400种，两者占总数的一半以上，
http://www.chp.org.cn/2005gs/swfl/swfl.htm
国家标准品及生物参考品系指用于鉴别、检查含量或效价测定的标准物质，其制备与标定应符合“生物制品国家标准物质制备和标定规程”要求，并由国务院药品监督管理部门指定的机构分发。企业工作标准品或参考品必须经国家标准品或参考品标化后方能使用。
对照品系指用于生物制品理化等方面测定的特定物质，由生产单位采用与制品生产工艺相同的方法制备。对照品应尽可能与制品原液配方一致，稳定性较差的，可加不含对测定有干扰物质的适宜的稳定剂。对照品由国家药品检定机构审查认可，其标准应不低于制品的质量标准。
From:[url]http://www.pharm.sdu.edu.cn/peiyang/jiaoan/yaowufenxihx.doc[/url]
（3）标准品、对照品：是指用于鉴别、检查、含量测定的标准物质，均由国务院药品监督管理部门指定的单位制备、标定和供应。标准品系指用于生物测定、抗生素或生化药品中含量或效价测定的标准物质，一国际标准品进行标定；对照品出另有规定外，按干燥进行计算后使用。
标准品和对照品均附有使用说明书，质量要求，有效期和装量等。
From:[url]http://www.chp.org.cn/2005gs/swfl/swbz.htm[/url]
1定义
生物制品标准物质系指用于生物制品效价、活性或含量测定的或其特性鉴别、检查的生物标准品或生物参考物质。
2标准物质的种类
生物制品标准物质分为二类。
国家生物标准品系指用国际标准品标定的，或我国自行研制的(尚无国际生物标准品者)用于定量测定某一制品效价或毒性的标准物质，其生物活性以国际单位（IU）或以单位（U）表示。
国家生物参考品系指用国际参考品标定的，或我国自行研制的(尚无国际参考品者)用于微生物(或其产物)的定性鉴定或疾病诊断的生物试剂、生物材料或特异性抗血清；或指用于定量检测某些制品的生物效价的参考物质，如用于麻疹活疫苗滴度或类毒素絮状单位测定的参考品，其效价以特定活性单位表示，不以（IU）表示。
From:[url]http://www.proteomics.com.cn/msl/papers/Notice1.html[/url]
1 对照品与标准品概念不清
对照品与标准品是2个不同的概念，中国药典凡例中已有明确的定义：对照品系指用于鉴别、检查、含量测定和校正检定仪器性能的标准物质，而标准品系指用于生物检定、抗生素或生物药品中含量或效价测定的标准物质，以效价单位(U)表示。文献中常将2种概念混淆，认为对照品就是标准品，是1种物质2种提法而已［1，2］，造成错误的原因，可能是有的药品既有对照品，又有标准品。例如，当用微生物法测定头孢克罗效价时，用头孢克罗标准品，用HPLC或UV法测定时，则用对照品；非那西丁当用作熔点校准物质时，用熔点标准品，测定含量时，用对照品。即使是同一种物质的标准品和对照品，它们的规格、标定方法以及用途都可能是不同的。
2 对照品或标准品混用
对照品或标准品混用，即将对照品或标准品用于不是其标定方法的含量测定，是药品检验中经常出现但未引起重视的一个问题［3］。尽管同一批对照品不同标定方法的含量有很好的相关性，但并不完全相同，有时差别会很大。如英国Glaxo公司提供的头孢呋肟酯对照品，HPLC标定为96.9%，供含量测定用；UV为98.8%，供溶出度测定。虽然中国药典凡例明确规定卫生部所发对照品仅用于正文中所规定的分析方法。但由于：(1)卫生部提供的对照品使用说明书不够详尽，大多无对照品质量要求及标定方法；(2)对对照品或标准品的正确使用缺乏认识；(3)日常科研中极难找到相应的对照品；(4)中国药典正文中也常存在对照品混用的问题，如常将含量测定用的标准品或对照品用于溶出度检查，而含量测定方法与溶出度分析方法又不同，故极易引起混用。
有关于标准品,校准品及质控品的区别 123
tang15092015-12-07
荧光微球活化后离心得不到沉淀 免疫学讨论版123
雨落魂殇2021-07-26
生化分析仪50问 123
hunterddh2015-08-24
进站很久了，每天都回来转转，却很少发帖，今天就说说我上班来碰到的问题吧，前辈们多多指导。我实习的时候在上海，实习医院不论是设备还有管理都比较规范，在那里也学到不少知识，在那里呆了一年时间也形成很多......
生化标准品_标准品_生化试剂_知道_生物信息网123
kunben2004-06-16
很多战友询问一些标准品对照品的购买方式，这里列出一些常用的电话和网址，另外很多地方药检所都会备有一些常用的对照品，大家可以就近联系购买，部分地方所提供邮购服务（有笑脸的单位服务好，可邮购）：
＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝
提醒大家几点：中检所和各地药检所售的都是药典或国家标准中应使用到的标准品和对照品，如果您是建立新药或某些新方法所用到的对照品，他们哪儿一般不会有，此时多为各研究单位自行制备对照品。
在您打电话询问时可以登入中检所的网站在搜索模块中下拉标准物质搜索，看看中检所是否已有此种物质。
若为地方升国标的标准中用到的对照品，中检所一般较少有，最好的方法是找到原始地方标准所在地，与该地的省所联系购买。
＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝
中检所：010－6705152467017755转219/239
北京所：010－66125040
:)河北所：0311－6673174
:)四川所：028－87525503
:)广东所：020-81847931
http://www.gdyjs.org.cn/wxyd/jj.htm
海南所：0898－66222646、66219706、66219772、66218770
http://www.hnyjs.org
:)江苏所：025-83203019852913198663952286631803
http://www.jsidc.org/zxfw/cpzs1.asp
浙江所：0571-8645317186457786
中药标准品：
http://xiehegroup.cn/public_html/page/zjxh_xhqx_zykfzxml.htm
http://www.cctyi.com
http://www.chem911.com/htmls/urls/standard.asp
进口试剂：
http://www.jkchemical.com/home.htm（该公司可以提供USP/BP/JP的对照品）
http://218.30.124.40/
将不定期更新
～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～
广东药检所2003年的对照品一览表，可下载查询：
呵呵，kunben兄我修改一下标题！看看大家效果！
2003年标准品一览表.zip(59.72k)
＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝
提醒大家几点：中检所和各地药检所售的都是药典或国家标准中应使用到的标准品和对照品，如果您是建立新药或某些新方法所用到的对照品，他们哪儿一般不会有，此时多为各研究单位自行制备对照品。
在您打电话询问时可以登入中检所的网站在搜索模块中下拉标准物质搜索，看看中检所是否已有此种物质。
若为地方升国标的标准中用到的对照品，中检所一般较少有，最好的方法是找到原始地方标准所在地，与该地的省所联系购买。
＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝
中检所：010－6705152467017755转219/239
北京所：010－66125040
:)河北所：0311－6673174
:)四川所：028－87525503
:)广东所：020-81847931
http://www.gdyjs.org.cn/wxyd/jj.htm
海南所：0898－66222646、66219706、66219772、66218770
http://www.hnyjs.org
:)江苏所：025-83203019852913198663952286631803
http://www.jsidc.org/zxfw/cpzs1.asp
浙江所：0571-8645317186457786
中药标准品：
http://xiehegroup.cn/public_html/page/zjxh_xhqx_zykfzxml.htm
http://www.cctyi.com
http://www.chem911.com/htmls/urls/standard.asp
进口试剂：
http://www.jkchemical.com/home.htm（该公司可以提供USP/BP/JP的对照品）
http://218.30.124.40/
将不定期更新
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广东药检所2003年的对照品一览表，可下载查询：
呵呵，kunben兄我修改一下标题！看看大家效果！
2003年标准品一览表.zip(59.72k)
【原创】荧光微球吞噬实验的ProtocolPolysciences品牌咨询123
mornsmile2021-07-29
最近有两位战友发信询问我的荧光微球吞噬实验的Protocol。
现分享于此：
LatexBeadsPhagocytosisassay
---Materials
*Fluorescencelabeledlatexbeads(1umdiameter),2.5%aqueoussUSPension
*3%BSAcontaining25mMNa2HPO4,pH6.0
*0,3%(w/v)azide
*Culturemediumcontaining5%FBS
*Distilledwater,PBS
*Bathsonication,6(12)-wellplates
---Cellcultureandtreatment
1,Inoculateplateswith7,0104cells/cm2perwell.Incubateat37℃,5%CO2for24hr,bestuntil50-70%confluenceisreached
2,Removeculturemediumandexposethecellstotestmaterial.Incubateat37℃,5%CO2for24hr.
---Preparationofcoatedlatexbeads
1，Washlatexbeadswithdistilledwaterandpelletat10,000gfor8minatRT.
2，Resuspendlatexbeadsin3%BSAcontaining25mMNa3PO4(pH6.0)andincubateatRTfor15minwithbathsonication.
*CoatingbeadsinBSAinsuresbeadsremaininamonodispersestate.
3，Washthebeadsoncewithculturemediumcontaining5%FBS.
4，Resuspendthebeadsinculturemediumatconcentration2.0%.Thisisbeadsstock.Storedindarknessat4℃.
---Assay
1，Controlsandsamples:Intactcontrol(Nostaining)1well
-Negativecontrol(azidetreated)1well
-Normalcontrol1well
-sample5wells
*Inordertodifferentiatebetweenphagocytosedbeadsandbeadsnonspecificallyadheretothecellsurface,controlcellsareexposedto0,3%(w/v)azidefor10minpriortotheadditionofcoatedbeads.Thistreatmentcompromisesmicroglialenergeticprocessesandfewbeadswereinternalizedasobservedbyfluorescentmicroscopy.Meanfluorescenceofazide-treatedmicrogliawasusedasthenegativecontrolandwassubtractedfromvaluesobtainedinexperimentalsamples.
2，Forexperimentsusing6well-plates,15μlbeadsstockin1mlculturemediumisappliedtoeachwell.Votexthebeadsstockwellandtakeout105μlandaddinto7mlculturemedium.Bathsonificatefor10minatRTindarkness.Thisisbeadsworkingsolution.
Forexperimentsusing12well-plates,6μlbeadsstockin0.4mlculturemediumisappliedtoeachwell.
3，WasheachwelltwicewithPBSandreplacewithbeadsworkingsolution,1ml/wellfor6-wellplate,0.4ml/wellfor12well-plate.Incubateinthedarkat37℃for80-120min.
4，Removebeadsworkingsolutionandwash3timeswithPBStoremoveexcessbeads.
5，LiftthecellsbyscrappingortrypsinizationandwashthecellswishPBS.
6，StainwithPI(4ug/mlfinalconcentration)andrunforFACS.
现分享于此：
LatexBeadsPhagocytosisassay
---Materials
*Fluorescencelabeledlatexbeads(1umdiameter),2.5%aqueoussUSPension
*3%BSAcontaining25mMNa2HPO4,pH6.0
*0,3%(w/v)azide
*Culturemediumcontaining5%FBS
*Distilledwater,PBS
*Bathsonication,6(12)-wellplates
---Cellcultureandtreatment
1,Inoculateplateswith7,0104cells/cm2perwell.Incubateat37℃,5%CO2for24hr,bestuntil50-70%confluenceisreached
2,Removeculturemediumandexposethecellstotestmaterial.Incubateat37℃,5%CO2for24hr.
---Preparationofcoatedlatexbeads
1，Washlatexbeadswithdistilledwaterandpelletat10,000gfor8minatRT.
2，Resuspendlatexbeadsin3%BSAcontaining25mMNa3PO4(pH6.0)andincubateatRTfor15minwithbathsonication.
*CoatingbeadsinBSAinsuresbeadsremaininamonodispersestate.
3，Washthebeadsoncewithculturemediumcontaining5%FBS.
4，Resuspendthebeadsinculturemediumatconcentration2.0%.Thisisbeadsstock.Storedindarknessat4℃.
---Assay
1，Controlsandsamples:Intactcontrol(Nostaining)1well
-Negativecontrol(azidetreated)1well
-Normalcontrol1well
-sample5wells
*Inordertodifferentiatebetweenphagocytosedbeadsandbeadsnonspecificallyadheretothecellsurface,controlcellsareexposedto0,3%(w/v)azidefor10minpriortotheadditionofcoatedbeads.Thistreatmentcompromisesmicroglialenergeticprocessesandfewbeadswereinternalizedasobservedbyfluorescentmicroscopy.Meanfluorescenceofazide-treatedmicrogliawasusedasthenegativecontrolandwassubtractedfromvaluesobtainedinexperimentalsamples.
2，Forexperimentsusing6well-plates,15μlbeadsstockin1mlculturemediumisappliedtoeachwell.Votexthebeadsstockwellandtakeout105μlandaddinto7mlculturemedium.Bathsonificatefor10minatRTindarkness.Thisisbeadsworkingsolution.
Forexperimentsusing12well-plates,6μlbeadsstockin0.4mlculturemediumisappliedtoeachwell.
3，WasheachwelltwicewithPBSandreplacewithbeadsworkingsolution,1ml/wellfor6-wellplate,0.4ml/wellfor12well-plate.Incubateinthedarkat37℃for80-120min.
4，Removebeadsworkingsolutionandwash3timeswithPBStoremoveexcessbeads.
5，LiftthecellsbyscrappingortrypsinizationandwashthecellswishPBS.
6，StainwithPI(4ug/mlfinalconcentration)andrunforFACS.
【求助】想问问标准品的处理!_化学试剂_基础知识专区_仪器论坛123
emxz2007-06-21
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winne_jin2021-07-24
荧光染料与多少dna结合肉眼可见颜色变化123
伤逝_JaynE羣2018-01-17
碘化丙啶(propiolium iodide，PI)能嵌入DNA双螺旋中，可使荧光强度增加约20倍，以488nm波长激发，DNA/PI复合物最大的发射波长约为615nm。小鼠Lewis肺癌细胞DNA含量测定方法(1).从C57BL/6小鼠上切除肿块，在培养皿内用PBS冲洗。(2).去除结缔组织及，剪碎肿块。(3).小碎片移入1.20×38mm针,加压使其通过,于4℃条件下重悬细胞于HBSS中。(4).将200～300μL细胞悬液(5×105细胞/mL)中加入3mL PI(50μg/mL)，染色3LL细胞，于4℃存放20～30分钟。(5).测定580～750nm之间的发射荧光，以去除末结合PI产生的激发光与发射光谱线之间的重叠部分。注：PI染色液：0.1%柠檬酸钠1000mL+PI 5mg + 1% Nonide P40水。2. 培养细胞DNA的流式细胞仪分析(1).从培养皿中吸去培养基，以HBSS冲洗二次。(2).加入PI5mL于培养皿中，在4℃放10分钟。(3).用吸管反复次打细胞，使细胞破坏，胞核释放出来，再行流式细胞仪分析。3. 完整细胞DNA的PI染色(1).70%乙醇固定的细胞悬液，离心，去固定液。(2).室温条件下加入PI染色一批细胞（105～106细胞/mL），时间为30分钟，然后行流式细胞仪分析。（二）吖啶橙染色1. DNA和RNA的鉴别染色利用吖啶橙的变色特性可鉴别DNA和RNA。吖啶橙作为一种荧光染料已被用于染色固定，非固定细胞核酸，或作溶酶体的一种标记。观察死亡细胞荧光变色性变化以及区别分裂细胞和静止细胞群体。虽然测定DNA和RNA含量时较难获得好的重复性结果，但该方法已被许多实验室广泛采用。方法如下：1）试剂：（1）溶液A：低温保存，稳定期约2周。Triton X-100(0.1%) 0.1mL，1mol/L HCL 8mL1mol/L NaCL 15ml蒸馏水76mL，P
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