PCR扩增制备带标记探针仪表展览网
PCR扩增制备带标记探针
实验步骤
1.生物素标记
应用bio-11-dUTP部分替代dTTP搀入PCR扩增探针中
1)配制反应体系
dNTP的组成 dATP、dCTP、dGTP各20mmol，dTTP15mmol，bio-11-dUTP5mmol混匀，其他试剂如常规PCR。
2)25循环后，冻存，取出化冻，趁下层水相尚在冰冻状态，吸尽石蜡油
3)水相中20mg/ml糖原1ul，pH5.22.5MnaAC10ul，220ul无水乙醇。混匀后－20℃过夜
4)离心取沉淀，冷冻干燥后100ul水或TE复溶。
2.地标记
应用dig-11-dUTP部分替代dTTP搀入PCR扩增探针中
1)配制反应体系
dNTP的组成 dATP、dCTP、dGTP各200umol，dTTP130umol，bio-11-dUTP70umol混匀，其他试剂如常规PCR。
2)35循环扩增产物
30扩增产物纯化与DIG随机标记探针方法相同（仅沉淀时，50ulPCR反应液中加入5ul4MliCl和150ul冰乙醇）。
注意事项
1.标记时标记基团在dNTP中占的比例不能太高，因标记基团与dTTP相比具位阻效应，比例太高PCR扩增及以后的杂交都要受到影响。
2.靶DNA用量不能太高，生物素标记中控制在0.2fmol左右；地高标记中可低至0.1ng。
免责声明 本文仅代表作者个人观点，与本网无关。其创作性以及文中陈述文字和内容未经本站证实，对本文以及其中全部或者部分内容、文字的真实性、完整性、及时性本站不做任何保证或承诺，请读者仅作参考，并请自行核实相关内容。
版权声明 未经蚂蚁淘授权不得转载、摘编或利用其他方式使用上述作品。已经经本网授权使用作品的，应该授权范围内使用，并注明“来源：蚂蚁淘”。违反上述声明者，本网将追究其相关法律责任。
发布于 ： 2018-01-23
阅读（45）
▍
相关分类
▍
相关文章
大鼠22种细胞因子和趋化因子检测试剂盒 询价,型号3KING012...
Dongnam Chemical Co Ltd出口数据及联系方式
稳中求胜123456789的头条主页 今日头条(www.toutiao.com)
Cancer Res|蛋白组学 多组学 肝癌患者肿瘤 发生和转移机制研究...
双歧杆菌(Bifidobacterium)鉴定16S rDNA PCR扩增检测试剂盒 询价,型号J...
德语助手|德汉汉德词典 Grau是什么意思_Grau的中文解释和 ...
PCR扩增产物鉴定与纯化实验原理及实验过程资讯...
细胞实验技术之细胞周期检测
corporin是什么意思_corporin在线翻译_英语_读音_用法_例句_海词词...
优惠供应Trevigen原装进口DNA损伤彗星分析实验试剂盒丨 ...
血清TC学术百科知网空间
类风湿药物来氟米特显示黑色素瘤治疗潜力_药界动态_健康一线资讯
▍
相关问答
