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RhD血型定型试剂(单克隆抗体IgMIgG)
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实验方法原理
冰醋酸、对氨基苯磺酸和盐酸萘乙二胺配成吸收液,采样时大气中的氮氧物经氧化管后以NO2形式被吸收,生成亚硝酸和硝酸,亚硝酸与对氨基苯磺酸起重氮化反应,然后再与盐酸萘乙二胺偶合成玫瑰红色的氮化物,其颜色深浅与气样中NO2浓度成正比,用分光光度法进行测定。由于气样中NO不与吸收液发生反应,所以测定氮氧化物总量时必须先使试样通过氧化管,将NO氧化成NO2后,再通过吸收液进行显色。由此可知样气不通过氧化管测得的是NO2含量,通过氧化管测得的NO2和NO的总量,
二者之差为NO的含量。
实验材料
试剂、试剂盒
仪器、耗材
实验步骤
一、试剂
 
1. 吸收原液(显色液):称取5.0g对氨基苯磺酸,直接放入1000mL棕色容量瓶中,加入50mL冰乙酸和900mL水,盖上瓶塞,轻轻摇动,待溶解完后,加入0.05g盐酸萘乙二胺,溶解后用水稀释至标线,移至棕色瓶中。密封存放于冰箱中可保存3个月。若呈现红色应弃之重配。
 
2. 吸收液:取上述4体积吸收原液,和1体积水混合均匀,即得吸收液。临用前配制。
 
3. 氧化剂:筛取20~40目石英砂,用(1+2)盐酸溶液浸泡一昼夜,用水洗至中性烘干。把三氧化二铬和石英砂按质量比1:20混合,加少量水调匀,105℃烘干,烘干过程中应多次搅动。制作好的三氧化二铬-石英砂应是松散的,若粘在一起,说明三氧化二铬太多,可适当多放一些石英砂,重新配制。将制作好的三氧化二铬-石英砂装入氧化管中,两端用脱脂棉塞好,用乳胶管两端连接密封制成氧化管。
 
4. 亚硝酸钠标准贮备液(CNO2-=100ug/mL):称取0.1500g在干燥器内放24h的亚硝酸钠(NaNO2)溶于水中,定容至1000mL,移至棕色试剂瓶中。保存于冰箱中有效期为3个月。
 
5. 亚硝酸钠标准液(5.0ug/mL):吸取5mL上述贮备液于100mL容量瓶中,用水定容。临用时配制。
 
二、实验步骤
 
1. 标准曲线的绘制

取7支具塞比色管编号,按表1配制标准溶液系列。各管摇匀后避光放置15min,用1cm比色皿于波长540nm处,以水为参比测定吸光度,用最小二乘法计算标准曲线的回归方程:
Y=bx+a
式中:
Y——标准溶液吸光度A与空白吸光度A0之差;
b——回归方程的斜率;
x——NO2
-含量,ug;
a——回归方程截距。
 
2. 采样与显色

在一个多孔玻璃板吸管中,加入5mL吸收液,进气口用一条尽量短的乳胶管连接氧化管,以0.25L/min的流量采样至吸收液呈玫瑰红色为止(采样过程中应采取避光措施)。采样后,样品应尽快分析。记录采样现场温度和大气压力。
 
表1亚硝酸钠标准溶液系列
 
3. 样品的测定

采样后于暗处放置15min,将样品移入1cm比色皿中,按照绘制标准曲线的方法和条件测定空白和样品吸光度。
 
三、结果计算
 
C(NOx)=(A-A0-a)×V/(b×0.76×V0)
式中:
C(NOx)——空气中Nox的浓度(以NO2计),mg/m3
0.76——NO2(气)转化成NO2-(液)的系数;
V0——换算为标准状态下的采样体积,mL;
A——样品溶液吸光度;
A0——试剂空白吸光度;
a——回归方程截距;
b——回归方程的斜率。
注意事项
1. 吸收液应避免在空气中长时间暴露,以免吸收空气中的氮氧化物而使试剂空白值增高。日光照射能使吸收液显色,因此,在采样、运送及存放过程中,都应采取避光措施。
 
2. 采样完毕,如吸收液体积显著减小,要用水补充到原来的体积。
 
3. 三氧化二铬-石英砂适合于在空气湿度30%~70%时使用,湿度大于70%时应勤换氧化管。当发现氧化管吸湿变绿时应及时更换。氧化管中三氧化二铬石英砂板结会使采样系统阻力增大,影响流量,应更换。
 
4. 吸收液受三氧化二铬污染时,溶液呈黄棕色,该样品作废。
 
5. 氧化剂也可采用酸性高锰酸钾溶液,不受空气湿度影响,无毒,使用寿命长,便于长时间采样用。
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