原位杂交实验步骤
| 实验方法原理 | 用力使培养基中的组织通过一系列筛孔尺寸逐渐减小的筛网，直到产生单细胞或小组织块的理想悬液，悬液可直接稀释并培养。 | ||
|---|---|---|---|
| 仪器、耗材 | 生长培养基镊子筛网皮氏培养皿手术刀一次性塑料注射器培养瓶 实验步骤 | 1.清洗后切割组织（见方案12.5的步骤1和步骤2），将组织切碎为3~5mm3大小，每次取几块组织块放在孔径1mm的不锈钢或聚丙烯筛网（筛网或孔径100μm~20μm的一系列筛网，或Falcon的细胞滤器）上，网置于9cm皮氏培养皿中或离心管中。   2.用注射器（一次性塑料注射器，2ml或5ml）的芯轻轻加压使组织通过网孔进入培养基，吸取培养基（生长培养基，如：DMEM/F12，含10%胎牛血清）吹过筛网将细胞冲下。 3.吸取分离的组织加入100μm孔径的筛网，重复步骤2。 4.此时获得的细胞悬液可稀释接种，若为了得到单细胞悬液也可进一步通过20μm的筛网。通常对细胞悬液分离程度越高剪切力越大，存活率越低。 5.用培养基将细胞悬液稀释至2×105/ml、1×106/ml或2×106/ml，接种于培养瓶。 |
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发布于 ： 2021-09-17
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