实验原理
脂质体（LR）试剂是阳离子脂质体DOTMA和DOPE的混合物（1：1）。它适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中，是目前条件下zui方面的转染方法之一。转染率高，优于磷酸钙法，比它高5-100倍，能把DNA和RNA转染到各种细胞。
用LR进行转染时，首先需要优化转染条件，应找出该批LR对转染某一特定细胞适合的用量、作用时间等，对每批LR都要做。先要固定一个DNA的量和DNA/LR混合物与细胞相互作用的时间，DNA可从1-5ug和孵育时间6h，开始，按这两个参数绘出相应LR需用量的曲线，再选用LR和DNA两者zui佳的剂量，确定出转染时间。因LR对细胞有一定的毒性，转染时间以不超过24h为宜。
细胞种类：COS-7、BHK、NIH-3T3、Hela和Jurkat等任何一种细胞均可作为受体细胞。
实验步骤
1.操作步骤（方法一）：
1）取6孔培养板，向每孔中加入2ml含（1-2）x105个细胞的培养基，37℃、18%CO2培养基40%-60%汇合时。
2）转染液制备：在聚苯乙烯管中制备以下两液（为转染1个空细胞所用的量）。
A液：用不含血清培养基稀释DNA使浓度为1-10ug，终量100ul。
B液：用不含血清培养基稀释LR，使终浓度为2-50ug，终量100ul。
轻轻混合A液、B液，室温中置10-15min，稍后会出现微浊现象，但并不妨碍转染。
3）转染准备：用2ml不含血清培养基漂洗2次，再加入1ml不含血清培养基。
4）转染：把A/B复合物缓缓加入培养基中，摇匀，置37℃温箱中6-24h，吸除无血清转染液，换入正常培养基继续培养。
5）其余处理：如观察、筛选、检测等与其他转染法相同。
6）注意：转染时切勿加血清，血清对转染效率有很大影响。
2.快速脂质体转染法操作步骤（方法二）：
1）将细胞以5x105个/孔接种于6孔板中培养24h，使其达到50%-60%板底面积。
2）在试管中配制DNA-脂质体复合物。
a.在1ml无血清DMEM中稀释PSV1-neo质粒DNA或供体DNA。
b.旋转1s，再加入脂质体悬液，旋转。
c.室温下放置5-10min，使DNA结合在脂质体上。
3）弃去细胞中的旧液，用1ml无血清DMEM洗细胞1次后弃去，向每孔中直接加入1mlDNA-脂质体复合物，37℃培养3-5天。
4）再于每孔中加入含20%胎牛血清的DMEM，继续培养14-24h。
5）吸出DMEM-DNA-脂质体混合物加入新鲜含10%胎牛血清的DMEM，2ml/孔，再培养24-48h。
6）用细胞刮或消化法收集细胞，以备分析鉴定。
3.稳定的脂质体转染法：
1）接种细胞同前述，细胞长至50%板底面积可用于转染。
2）DNA-脂质体复合物制备转染细胞同前。
3）在每孔中加入1ml含20%胎牛血清的DMEM，37℃培养48h。
4）吸出DMEM，用G418选择性培养基稀释细胞，使细胞生长一定时间，筛选转染克隆，方法参照细胞克隆筛选法进行。
4.Invitrogen公司的Lipofectamine2000在24孔板转染单层贴壁细胞。（别的方法可以参考生产商提供的protocol）
1）转染前1天将0.5～2×105细胞接种于24孔培养板，并加入500ul不含抗生素的完全培养基，以保证转染时细胞汇合达90～95％。
2）准备复合物
a.将0.8ugDNA稀释于50ul无血清无抗生素的培养液中轻轻浑匀。
b.将2ulLipofectamine2000稀释于50ul无血清无抗生素的培养液中，轻轻浑匀，室温孵育5分。注意：必须在25分内进行。
c.5分后将它们混合，并轻轻浑匀，室温孵育20分。
3）吸去培养板的培养基，用PBS或无血清培养基（zui好）清洗细胞2次。
4）将复合物（总体积100ul）加入培养孔，前后摇动培养板使其分布均匀。
5）将细胞放入培养箱孵育4～6h后，可以更换含血清培养液去除复合物（也可不用）。
6）24～48h后可以观察转入基因表达情况。
7）稳定转染：换含血清培养基24h后将细胞以1：10（或更高比例）传代，1天后更换筛选培养基筛选。
8）优化：要保证细胞汇合率达90～95％（比较高）；DNA/Lipofectamine2000比率1：0.5～1：5，一般细胞1：2～3。
