| 实验材料 | 动物组织 |
|---|---|
| 试剂、试剂盒 | 正己烷乙酸乙酯-叔丁基甲醚 |
| 仪器、耗材 | 离心管ExtruletNT20柱涡旋混合器 |
| 实验步骤 | 1. 分析步骤
称取10.Og样品加6mL缓冲溶液均质2min，再加入8mL缓冲溶液，37℃过夜。在4℃4000r/min离心15min，取出上清液，样品中再加入8mL缓冲溶液，同上操作。合并上清液。
上清液用2×10mL正己烷脱脂两次，弃去正己烷，剩余溶液调pH值到6.0，然后过ExtruletNT20柱，平衡20min后，加入20mL乙酸乙酯-叔丁基甲醚（1+1）平衡20min后，洗脱至离心瓶，再加入20mL乙酸乙酯-叔丁基甲醚重复洗脱1次，洗脱液35℃以下旋转蒸发至近干，转移至5mL具塞玻璃离心管用氮气吹干。
加入50uL异辛烷和150uLBSA，涡旋混合器混匀，50℃恒温水浴衍生化60min，定容到10000L，供气相色谱、质谱测定。
2. 色谱测定条件
色谱柱I:30m×0.25mm×0.25um，DB-5MS，FinniganGCQ（离子阱），用于NCI和MS/MS测定。
色谱柱n：30m×0.25mm×0.25um，DB-1，HewlettPackardGC/MSD用于EI/MS测定。
进样口温度程序：60℃（1.5min），12℃/min，144℃，5℃/min，184℃，25℃/min，290℃（6min）；
载气：氦气，恒压模式，柱头压10psi；不分流进样。
3. 质谱条件
电离源：EI；
传输线温度：280℃；
溶剂延迟：5min；
离子源温度：150℃；
四极杆温度：100℃。
选择离子监测：二硝基咪唑（DMZ）监测离子m/z：141、112、98；异丙硝唑（IPZ）监测离子m/z：169、154、123；罗硝唑（RNZ）监测离子m/z：214、168、167、153；异丙硝唑代谢物（IPZOH）监测离子m/z：242、226、196、184；甲硝唑（MNZ）监测离子m/z：228、197、182、167；甲硝唑代谢物（MNZOH）监测离子m/z：316、315、314、272。 展开 |
