常规转染技术可分为两大类，一类是瞬时转染，一类是稳定转染（*转染）。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中，因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数，产生高水平的表达，但通常只持续几天，多用于启动子和其它调控元件的分析。一般来说，超螺旋质粒DNA转染效率较高，在转染后24-72小时内（依赖于各种不同的构建）分析结果，常常用到一些报告系统如荧光蛋白，半乳糖苷酶等来帮助检测。后者也称稳定转染，外源DNA既可以整合到宿主染色体中，也可能作为一种游离体（episome）存在。尽管线性DNA比超螺旋DNA转入量低但整合率高。外源DNA整合到染色体中概率很小，大约1/104转染细胞能整合，通常需要通过一些选择性标记，如来氨丙基转移酶（APH；新霉素抗性基因），潮霉素B磷酸转移酶（HPH），胸苷激酶（TK）等反复筛选，得到稳定转染的同源细胞系。
转染技术的选择对转染结果影响也很大，许多转染方法需要优化DNA与转染试剂比例，细胞数量，培养及检测时间等。一些传统的转染技术，如DEAE右旋糖苷法，磷酸钙法，电穿孔法，脂质体法各有利弊，其主要原理及应用特点见下表：
转染方法
原理
应用
特点
磷酸钙法
磷酸钙DNA复合物吸附细胞膜被细胞内吞稳定转染
瞬时性转染
操作简便但重复性差
有些细胞不适用
DEAE-右旋糖苷法
带正电的DEAE-右旋糖苷与核酸带负电的磷酸骨架相互作用形成的复合物被细胞内吞瞬时性转染
相对简便、结果可重复但对细胞有一定的毒副作用
转染时需除血清
电穿孔法
高脉冲电压破坏细胞膜电位，DNA通过膜上形成的小孔导入稳定转染
瞬时性转染
所有细胞
病毒介导法
通过侵染宿主细胞将外源基因整合到染色体中稳定转染
可用于难转染的细胞、原代细胞，体内细胞等逆转录病毒
特定宿主细胞
但携带基因不能太大细胞需处分裂期需考虑安全因素
腺病毒
通过侵染宿主细胞将外源基因整合到染色体中瞬时转染
特定宿主细胞
需考虑安全因素
阳离子脂质体法
带正电的脂质体与核酸带负电的磷酸基团形成复合物被细胞内吞稳定转染
瞬时性转染
所有细胞
Biolistic颗粒传递法
将DNA用显微重金属颗粒沉淀，再将包被好的颗粒用弹道装置投射入细胞，DNA在胞内逐步释放，表达瞬时性转染
可用于：人的表皮细胞，纤维原细胞，淋巴细胞系以及原代细胞显微注射法
用显微操作将DNA直接注入靶细胞核稳定转染
瞬时性转染
多用于工程改造或转基因动物的胚胎细胞
;除上述传统方法外，近年来国际上推出了一些阳离子聚合物基因转染技术，以其适用宿主范围广，操作简便，对细胞毒性小，转染效率高受到研究者们的青睐。其中树枝状聚合物（Dendrimers）和聚乙烯亚胺（Polyethylenimine，PEI）的转染性能zui佳，但树枝状聚合物的结构不易于进一步改性，且其合成工艺复杂。聚乙烯亚胺是一种具有较高的阳离子电荷密度的有机大分子，每相隔二个碳个原子，即每第三个原子都是质子化的氨基氮原子，使得聚合物网络在任何pH下都能充当有效的质子海绵(protonsponge)体。这种聚阳离子能将各种报告基因转入各种种属细胞，其效果好于脂质聚酰胺，经进一步的改性后，其转染性能好于树枝状聚合物，而且它的细胞毒性低。大量实验证明，PEI是非常有希望的基因治疗载体。目前在设计更复杂的基因载体时，PEI经常做为核心组成成分。
线型PEI（LinePEI,LPEI）与其衍生物用作基因转染载体的研究比分枝状PEI（BranchedPEI,BPEI）要早一些，过去的研究认为在不考虑具体条件，LPEI/DNA转染复合物的细胞毒性较低，有利于细胞定位，因此与BPEI相比应该转染效率高一些。但zui近研究表明BPEI的分枝度高有利于形成小的转染复合物，从而提高转染效率，但同时细胞毒性也增大。超高分枝的、较柔性的PEI衍生物含有额外的仲胺基和叔胺基，在染实验中发现这种PEI的毒性低，但转染效率却较高。
订货信息
货号货号
品名
价格￥
规格
品牌
备注
23966-2
POLYETHYLENIMINELINEAR
2864
2g
polysciences
大量现货
24765-2
POLYETHYLENEIMINEMAX
3184
2g
polysciences
转染效率高30%更好溶解
C4058L1080
EZTrans细胞转染液
200
1ml
LifeiLab
23966配制
C4058L1082
EZTrans细胞转染液
1800
50ml
LifeiLab
23966配制
C4058L1084
EZTrans细胞转染液
5500
500ml
LifeiLab
23966配制
C4058L1090
EZTrans细胞转染液
200
1ml
LifeiLab
24765配制
C4058L1092
EZTrans细胞转染液
1800
50ml
LifeiLab
24765配制
C4058L1094
EZTrans细胞转染液
5600
500ml
LifeiLab
24765配制
78004qf01
POLYETHYLENIMINELINEAR
1432
1g
78bio
23966分装
78005qf01
POLYETHYLENEIMINEMAX(40000M.W.*
1592
1g
78bio
24765分装
PEI转染操作流程：
1、细胞传代：
转染前24h内分离293T细胞至含10％胎牛血清的DMEM培养基中进行传代培养，接种密度如下：
6孔板：0.5x106细胞
10cm培养皿：4.0x106细胞
15cm培养皿：9.0x106细胞
2、转染
转染前将所有试剂置于室温。
2.1质粒DNA的稀释
在无菌试管中，用无血清的DMEMW/O酚红培养基（浓度为10％）稀释质粒DNA（ug）。病毒包装体（psPAX2）：病毒包膜（pMD2G）和重组质粒DNA的稀释比例分别为4:2:1。
6孔板：200ul+3ug的DNA
10cm培养皿：1ml+7-8ug的DNA
15cm培养皿：2ml+11-12ug的DNA
2.2转染复合体形成
将PEI（1ug/uL）加入已稀释的总DNA中，PEI与DNA（ug）的混合比率为3:1。加入后立即涡旋混合。
6孔板：9ulPEI复合体（1ug/ul）=9ug
10cm培养皿：21ulPEI复合体（1ug/ul）=21ug
15cm培养皿：33ulPEI复合体（1ug/ul）=33ug
将添加到细胞的DNA/PEI的混合物在室温下孵育15分钟。
4、收获转染细胞
转染后48小时内收获转染细胞/或病毒上清。
试剂的配制：
PEI（1ug/ul）Polysciences（CAT＃23966-2配制成储液：
1、将无内毒素的无菌水加热至80℃左右溶解PEI，冷却到室温。
2、调整pH值至7.0，用0.22um的滤器过滤消毒，分装后储存在-20℃。工作液可保持在4℃。
96孔细胞培养板用量
细胞型号
培养基每孔细胞数DNA的量转染试剂量和培养基混合4-6h293HDMEM31040.2g0.5LDMEM+10%FBS293FTDMEM31040.2g0.5LDMEM+10%FBS293EDMEM31040.2g0.5LDMEM+10%FBS293FDMEM31040.2g0.5LDMEM+10%FBSCOS7DMEM1.51040.4g0.5LDMEM+10%FBShelaDMEM21040.3g0.5L1640+15%FBSCaco2MEM3.51040.3g0.75LMEM+10%FBSBHK21MEM21040.2g0.5LMEM+10%FBSCHO-DG44DMEM+HT+pro21040.5g0.5LDMEM+HT+pro+10%FBSRAW264.7DMEM31040.2g0.5LDMEM+10%FBSMCF7MEM/NEAA+0.01mg/mLinsulin+sodiumpyruvat21040.1g0.25LMEM/NEAA+0.01mg/mLinsulin+sodiumpyruvat+10%FBSSW480IMDM31040.4g0.5LIMDM+10%FBSMDCKDMEM41040.6g1LDMEM+10%FBSCHO-K1IMDM+Pro31040.2g0.5LIMDM+Pro+10%FBSHepG2DMEM31040.5g0.75LDMEM+10%FBSA549DMEM21040.3g0.5LDMEM+10%FBSNIH/3T3DMEM1.51040.1g0.75LDMEM+10%FBSveroDMEM31040.3g0.75LDMEM+10%FBSsf9SIMSF51040.4g0.75LSIMSF+10%FBSPEI于polyplus转染效率对比图
订货信息
货号
品名
价格￥
规格
品牌
备注
23966-2
POLYETHYLENIMINELINEAR
2864
2g
polysciences
大量现货
24765-2
POLYETHYLENEIMINEMAX
3184
2g
polysciences
转染效率高30%更好溶解
C4058L1080
EZTrans细胞转染液
200
1ml
LifeiLab
23966配制
C4058L1082
EZTrans细胞转染液
1800
50ml
LifeiLab
23966配制
C4058L1084
EZTrans细胞转染液
5500
500ml
LifeiLab
23966配制
C4058L1090
EZTrans细胞转染液
200
1ml
LifeiLab
24765配制
C4058L1092
EZTrans细胞转染液
1800
50ml
LifeiLab
24765配制
C4058L1094
EZTrans细胞转染液
5600
500ml
LifeiLab
24765配制
78004qf01
POLYETHYLENIMINELINEAR
1432
1g
78bio
23966分装
78005qf01
POLYETHYLENEIMINEMAX(40000M.W.*
1592
1g
78bio
24765分装
友情提醒：
Polyethylenimine,Linear(MW25,000)23966-2为Polysciences公司生产的化合物产品，每批产品出厂前都经过严格的检测,保证每批产品都100%合格、稳定且高品质,但由于作为转染试剂使用过程中有很多实验室因素(PH,水纯度,称量的准度,dna纯度)造成溶解出现问题或者转染效率出现差异,所以厂家只受理该产品纯度，分子量及重量缺失破损等相关投诉，针对极个别客户溶解问题和转染效率问题我们只能友善解决,所以不能保证您能获得满意答复，对于产品应用方法的问题，不作为评价我们售后工作的依据。
如果我们提供的PEI手册都无法解答您的问题,建议您可以多看文献,多调整一下转染条件,找出适合自己细胞的转染方法。如果无暇摸索条件,您也可以直接购买我们配好的转染试剂,这样免去您很多烦恼,谢谢理解
关注本网官方微信随时阅读专业资讯
