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| 선택 | Cat.No. | 제품명 | 가격(VAT별도) | 수량 |
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제품특징
□ 제품설명
효소에 잔존하는 DNA를 극한까지 억제한 PCR 시약TaKaRa Taq™HS Low DNA
● 저 복제 유전자의 특이적 PCR증폭이 가능
● 독자적 기술을 이용하여 숙주 대장균 유래 DNA 혼입을 극한까지 억제
● 업그레이드 효소 사용으로 기존의 고속 타입보다 높은 반응성 실현
● dNTP와 Mg2+을 포함한 2 x premix 시약
Takara Bio의 정제 기술과DNA불활성화 처리에 의해 PCR의 주형이 될 수 있는 효소 조제 후 남아 있는 숙주 대장균유래 DNA나 기타 제조 공정에서 투입한 원료 유래 DNA를극한까지 억제한 premix PCR시약이다. 신장 속도와특이성을 높인 개량형 Taq DNA polymerase를 사용함으로써 고감도로 특이적인 PCR증폭을 신속히 실시할 수 있다. 이 효소는 상온에서 DNA polymerase활성을 억제하는 monoclonal Ab를 첨가한 hot start PCR효소로 PCR반응 전 primerdimer 등에 기인한 비특이적 증폭을억제할 수 있다. 이 항체는 PCR의 최초의 변성 단계에서변성하기 위해 특별한 활성화 단계는 필요 없다.또 반응 구성요소가 미리 섞인 premix면서 상온에서의 신속한 반응액 조제가 가능하다.이 효소는 5"→ 3"exonuclease 활성과 3"→ 5"exonuclease 활성을 갖지 않는다.
□ 내용 (20 ㎕ 반응 계, 100회)
TaKaRa Taq™ HS Low DNA (2x) | 1,000 ㎕ |
dH2O for Low DNA | 1,000 ㎕ |
□ 보존
-20 ℃
□ 기원
Escherichia coli carrying a plasmid that encodes the Thermus aquaticus DNApolymerase gene
□ 일반적 PCR 반응 조성(Total 20 ㎕ 반응 계)
TaKaRa Taq HS Low DNA | 10 ㎕ |
Template | < 100 ng |
Primer 1 | 0.2 μM* (final conc.) |
Primer 2 | 0.2 μM* (final conc.) |
dH2O for Low DNA | Up to 20 ㎕ |
주) 반응액의 실온 조제도 가능하지만 시약은 반드시 얼음에 놓고 사용한다.* Ramp temperature speed가 5 ℃ 이상의 고속 thermal cycler를 이용하는 경우 primer 농도를 0.6 μM로 설정한다.
□ PCR 조건
*2 변성온도는 반드시 94 ℃로 설정해주세요. 변성온도를 95 ℃이상으로 설정하면효소 불활성화에 의해 반응성 저하가 발생합니다.*3 40 cycles이 넘는 증폭은 권장하지 않습니다.*4 Tm 근사 계산식으로 계산한 Tm값이 55 ℃ 이하의 경우(Nearest Neighbor법으로 계산한 Tm값이 60℃ 이하의 경우)는
3 step법으로 진행하세요.
□ 주의
본 제품은 기존 일반적인 PCR 효소에 비해 매우 적은 template량의 증폭에 대응하는 PCR효소로 미생물 검출을 목적으로하는 경우, 반응 장치에 혼입된 미량의 환경 세균의 DNA를주형으로 증폭하는 경우가 있습니다. 그러한 경우, PCR cycles수를 줄이고 primer 설계를 변경할 것을 추천합니다.
□ PCR 산물에 대해
TaKaRa Taq HS Low DNA를 이용해 증폭된 PCR산물의 대부분은 3"말단에 A가 1염기 부가되어 있다. 따라서 그PCR산물을 그대로 T-Vector에 cloning 할수 있다. 또 말단을 평활화하고 인산화하여 평활 말단의 벡터에 cloning할 수도 있다.
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今天文章就简单整理了一下最近遇到的问题，有些问题对你来说可能很简单，但是还是会给一些科研菜鸟带去小麻烦，特整理了这么个专场来涨涨姿势。
这里就简单整理了5个问题，具体内容如下：
小编自己在各大论坛看到最多的三个答案：
1）48T可做42个样本加6个标准曲线；96T可做90个样本加6个标准曲线
2）以96T试剂盒来算，定量的试剂盒一般可以做90个左右的样品，定性的试剂盒可以做94个左右的样品
3）96T的ELISA试剂盒，去除标准品复孔检测，最多还能检测80个标本；48T的最多30个样本。
2、elisa试剂盒96T的能做检测多少血清样品？板能重复利用吗？
96T，一般做复孔的话，做标准曲线需要16个孔，剩下80个孔就可以做40个样本。这个板不能重复利用。而且配套的试剂也只是够一块板子用的。
3、想请教一下，我想用elisa法测血清里的一种抗原，查了资料，发现没有现成的试剂盒用，现在就有2种备选方案，一种是买抗体对自己包被（查了R&D等大公司都没有可用于elisa的单抗）。哪种比较好呢？自己包被的会不会比国产的试剂盒可靠呢？
如果你觉得技术不错有队其他公司不放心，可以自己购买抗体对自己包被，这个就是麻烦点，自己包被用着放心，舒心；
另外国内还是有一些资质不错的公司，如北京达科为，上海巧伊，依科赛，深圳欣博盛等等
4、western和ELISA处理样本有何差别？
WesternBlot样品制备要加蛋白裂解液（含有蛋白酶抑制剂），然后冰上研磨，收集于EP管，冰上裂解30min，4度12000rpm离心15min，取上清分装，即得到蛋白样品。建议直接电泳，多余的-80保存。建议分装的蛋白每支略多于一次上样量，一次性用完一支，避免反复冻融。
ELISA样品，直接脑组织冰上匀浆，收集于EP管，同上一样离心，大约220-250ul每支分装（因为ELISA上样量基本都是每孔100ul，做复孔，每个样品2孔，就需要200ul，为了避免不够2孔，分装时要大于200ul每支），直接实验。多余的-80保存，一样避免反复冻融。
不过ELISA最好少量样品进行预实验，或者查阅文献，看看大概组织里有多高浓度，选择合适的试剂盒，测量范围要与组织浓度相符。避免浓度过高测量不准，或者浓度过低，小于试剂盒最低可测浓度。
5、Elisa试剂盒该买哪家公司的呢？
提出这个问题的朋友其实该打，目前国际上各个品牌的试剂盒生厂商，都会有其偏重点，像R&D在细胞因子方面的试剂盒就非常牛逼，而其他牌子也一样的。
Bender：粘附分子方面的试剂盒；
Cayman：花生四烯酸类产品的试剂盒；
Merck(Linco)：内分泌研究方面的试剂盒；
Tips：
1、买Elisa试剂盒时，尽量先查文献，通过文献找品牌，再找供应商，找供应商就找正规代理商，千万不要去干“赔夫人又折兵”的蠢事。
2、ELISA中，复孔就是同一个样品加到至少两个孔中（一般3个或4个），最后取其平均值作为样品的读数，这样测得的结果才有说服力！
做复孔是为了较好的较少组内差异，如果血清不足不做复孔也可以。
1、采用何种原料和抗体,是否高效、灵敏、特异
2、规范包被操作,吸附是否均匀
3、重复性、可靠性
6、是否提供技术服务
7、适用于血浆、血清、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等多种类型的样本
8、可检测动物类型是否丰富
9、可检测指标是否齐全
第二步、明确编码该蛋白的基因与其它哪些物种同源性最好
第三步、寻找检测这些物种蛋白的试剂盒
第四步、咨询商家ELISA是试剂盒使用的抗体类型:多抗还是单抗? 单抗是针对什么抗原决定簇的?
第五步、 做出自己的判断该买哪个试剂盒，或者实在没有可以找公司进行订制实验
