【求助】【【【【新手求助】】】】请问各位站友，我的逆转录试剂盒室温下放了6个小时还能用吗？

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2011-09-08

问题描述：

我是菜鸟！！！请问各位站友：我在做RT的时候逆转录试剂盒放在室温下6个小时，忘记放回-20度了，请问还能用吗？主要担心酶会失活，试剂盒是TAKARA的PrimeScriptRTReagentKit。刚买的第一次用就这样了，着急啊，请各位大侠帮忙解答下，谢了

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hyhyyl

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呵呵，淡定啊！没事的。RT逆转录试剂盒放在零下20度的原因是：防止反转录酶失活。为什么酶在室温下失活呢？是温度让它失活吗，答案是否定的，因为酶在42度下作用都有活性，所以在室温下不会失活的。之所以放在零下20度的真正原因是防止反转录酶等各种酶染上杂菌，杂菌产生蛋白酶分解酶，从而让酶失活。因此我们是试剂盒通常都冷冻贮存。你偶尔一次放在室温，应该没大问题，不要再犯就好！以后做的时候，把反转录酶和PCR聚合酶放在冰柜里，用的时候从里面加，用完即放回。其他的试剂也应分装。

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tobal2005

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展开引用hyhyyl呵呵，淡定啊！没事的。RT逆转录试剂盒放在零下20度的原因是：防止反转录酶失活。为什么酶在室温下失活呢？是温度让它失活吗，答案是否定的，因为酶在42度下作用都有活性，所以在室温下不会失活的。之所以放在零下20度的真正原因是防止反转录酶等各种酶染上杂菌，杂菌产生蛋白酶分解酶，从而让酶失活。因此我们是试剂盒通常都冷冻贮存。你偶尔一次放在室温，应该没大问题，不要再犯就好！以后做的时候，把反转录酶和PCR聚合酶放在冰柜里，用的时候从里面加，用完即放回。其他的试剂也应分装。......太感谢了，因为我这个试剂盒还没拆封，应该不会污染吧，一定接受这次的教训，以后要分装好，用完及时放回，希望看到此贴的新手&菜鸟们也要注意啦！谢谢楼上

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tobal2005

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事实证明，是可以用的，我把逆转录酶的量提高了一倍，最后跑荧光定量PCR结果还是很好的，证明之前逆转录是没问题的！

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