有人用过Thermo逆转录试剂盒么？

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有人用过Thermo逆转录试剂盒么？

2021-07-24

问题描述：

之前一直用的Takara的试剂盒，现在突然换成Thermo的，实验的条件需要重新摸索～看了说明书还是有几点不明白的？请园子里的大神指导～想知道：1、需要特地去除基因组DNA么？试剂盒里并没有DNase和RNase。2、说明书上，上机反应的条件是42摄氏度60min；70摄氏度5min；一共需要1个多小时！？看他产品推广说只需要30min就可以了～所以大家上机条件是怎样的？求指导

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飞虹万里

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小硕一枚，做实验不太规范，抛砖引玉，只能说下我们组的做法，问题1：一般细胞实验规范用Trizol法提出RNA后一般不去除基因组DNA，而组织样本一般要先加去除基因组DNA这一步。原因还是请大神补充。问题2：确实要用1个多小时，两种试剂盒都用过，确实Takala的省很多时间，一般实验转出的mRNA也够用，所以一般都喜欢用Takala的。愚见，请高手补充。

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瘦成滚地雷

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瘦成滚地雷

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展开引用飞虹万里小硕一枚，做实验不太规范，抛砖引玉，只能说下我们组的做法，问题1：一般细胞实验规范用Trizol法提出RNA后一般不去除基因组DNA，而组织样本一般要先加去除基因组DNA这一步。原因还是请大神补充。问题2：确实要用1个多小时，两种试剂盒都用过，确实Takala的省很多时间，一般实验转出的mRNA也够用，所以一般都喜欢用Takala的。愚见，请高手补充。......您好，谢谢之前为我解答，实际操作了一下，发现还有些细节问题，请您指教。1、扩增程序中有一个lidtemperature需要设置，实验室用的是伯乐的仪器，之前用takara试剂盒时设置的是105摄氏度？沿用这个温度可以么？2、关于产物稀释，说明书GAPDH对照试验按1:1000稀释，这个会不会太稀了

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飞虹万里

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瘦成滚地雷您好，谢谢之前为我解答，实际操作了一下，发现还有些细节问题，请您指教。1、扩增程序中有一个lidtemperature需要设置，实验室用的是伯乐的仪器，之前用takara试剂盒时设置的是105摄氏度？沿用这个温度可以么？2、关于产物稀释，说明书GAPDH对照试验按1:1000稀释，这个会不会太稀了lidtemperature应该是盖板温度，一般常规我们实验室用塔克拉和塞默的逆转录试剂盒都是设置的一样的105摄氏度。当然特殊情况具体分析吧。至于GAPDH，不太确定你的意思恕难以明确作答，不好意思。

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