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U-CyTech酶联免疫斑点(ELISPOT)测定法由Czerkinsky在1983 年开发。ELISPOT测定法是基于ELISA免疫测定法的改进版本而开发的。它是监测人和动物免疫反应的灵敏方法,是精确定量分泌细胞因子的T细胞或分泌抗体的B细胞的出色工具。
如今,ELISPOT测定法已广泛用于生物医学研究的不同领域,包括:
细胞因子ELISPOT分析旨在枚举淋巴组织,中枢神经系统组织,骨髓或外周血单核细胞(PBMC)制剂的单细胞悬液中分泌细胞因子的细胞。该测定法的优点是仅检测活化/记忆性T细胞,并且可以在单个细胞水平上检测细胞因子的释放,从而可以直接确定T细胞的频率。高灵敏度和简便的性能允许直接对肽反应性T细胞进行计数,而无需事先进行体外扩增,因此ELISPOT分析非常适合监视T细胞反应。
将细胞在预先涂有高亲和力抗体的96孔ELISPOT板的孔中孵育,该抗体可捕获分泌的细胞因子,趋化因子或颗粒酶。随后,裂解细胞并洗去碎片。随后,添加与捕获产物结合的生物素化抗细胞因子检测器抗体。酶标记的抗生蛋白链菌素或抗生物素抗体和底物的添加导致有色区域(“斑点”)。彩色斑点揭示了代表单个分泌性T细胞的细胞因子分泌位点,并使用自动ELISPOT读取器进行鉴定和计数。
ELISPOT试剂盒有不同格式(2板或5板试剂盒),并可以提供不同的着色剂(用于银染(在透明聚苯乙烯底的板上或PVDF膜底的板上产生“黑色”斑点)或酶染色(在PVDF膜底板上产生“红色”斑点)]。
由U形骏龙提供的ELISPOT试剂盒可用于检测的试剂盒人类和猴细胞因子,趋化因子或粒酶产生细胞,包括试剂盒对GM-CSF,粒酶B,IFN-γ,白介素家族成员(IL-1β,IL -2,IL-4等)和TNF-α。
猴子试剂盒中的抗体已经过验证,可以检测各种旧大陆猴子的细胞因子产生细胞,包括巴巴猕猴,狮子尾猕猴,猪尾猕猴,苏拉威西猕猴,日本猕猴,食蟹猴,叶猴,狒狒和猕猴。随后将推出用于其他猴子细胞因子的ELISPOT试剂盒,包括用于Marmoset(新世界猴子物种)细胞因子的试剂盒。
此外,U-CyTech还提供各种大鼠(IFN-γ,IL-4)和小鼠(IFN-γ,IL-4,IL-5,IL-6,IL-10,TNF-α)细胞因子ELISPOT试剂盒。用于大鼠和小鼠其他细胞因子的ELISPOT试剂盒正在开发中。

U-CyTech所述B细胞ELISPOT测定法已被设计为识别和计数单个抗体中的外周血单核细胞(PBMC)的单细胞悬浮液分泌B细胞人类或猴子。该技术基于与T细胞ELISPOT相同的固相免疫酶原理。该测定的第一步是通过多克隆或抗原刺激来扩增记忆B细胞。随后在用抗免疫球蛋白或目的抗原包被的ELISPOT 96孔板中计数扩增的B细胞。接下来,通过针对选择的免疫球蛋白类别的标记抗体检测斑点形成细胞。
每个试剂盒均包含用于刺激记忆B细胞的试剂,用于确定抗体分泌细胞总数的包被抗体,用于检测选择的免疫球蛋白类别的标记抗体和着色剂。试剂盒可提供不同的着色剂,分别用于银或酶法染色,分别产生“黑色”和“红色”斑点。
此外,U-CyTech还提供各种小鼠(IgG,IgG1,IgG2a,IgG2b)B细胞ELISPOT试剂盒,其他B细胞ELISPOT试剂盒也在开发中。
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