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各位战友,小弟刚开始养细胞,但是细胞状态一直不好,最近一次传代后,一传二,居然两个皿里细胞状态完全不同,第一个皿还能看见细胞的形态,而第二个皿几乎看不见贴壁的细胞,请问大家遇见过这种情况吗?
以前先放-80再液氮,但是去-80冰箱有点远,我想能不能直接放液氮里面,我直接放过复苏成活率低了很多,有没有这种冻存盒可以直接放液氮的?
做细胞实验快半年了,一直都还挺顺的,这次五一放完假回来,复苏一支HK2,操作都跟以前一样,没想到出了好多问题:
冻存方法:包裹棉花直接-80℃过夜,第二天转移到液氮
冻存时间:1个半月前冻存的细胞,密度保证没问题,冻存前状态也好
复苏方法:液氮取出后37℃水浴,约2分钟溶解,加入6倍体积的完全培养基,800转离心5分钟,弃去上清,1ml完全培养基重悬,转移入培养皿(进口一次性塑料培养大皿),补足完全培养基,培养箱培养
第二天看细胞全都没贴壁,但是也没死,聚集成团装飘着,没有污染。不想重新离心加重机械损伤,就一直试试看的心态放在培养箱里养着了。又重新复苏一支,还是一样的结果,全飘着没贴壁。不死心,就往前面复苏的那一皿里直接加了1ml的血清,相当于18%的血清比例,过了一天去看,这下细胞都贴壁了。没有另外添加血清的那一皿就还是没贴壁。
另外还有一支以前复苏的HK2,也是一样的方法复苏的,那次复苏很好,细胞基本没什么死的,也都贴壁了,养在皿里状态也不错,但是拿来铺板就还是不贴壁,同样的培基(10%血清),铺板就一个不贴,皿里就都可以贴上。
求助各位战友:
1、复苏不贴壁是为什么?
2、增加血清比例能使复苏的细胞贴壁,这样的细胞是不是可以认为状态并不好,以后的培养是不是要一直这么高比例的血清?还是可以培养一段时间逐步减少血清比例?
3、仍然是10%血清,为什么铺板就不贴壁,而皿里的就没事?是不是铺板的时候也要增加血清比例呢?那在板里干预的过程中是不是要一直保持高比例的血清培养?
4、我的冻存及复苏方法是否有错?我觉得我的HK2从形态、生长速度上来说状态应该是不错的,而且我已经更换了全新的培基、血清和双抗,重新配置了完全培养基,不知道为什么会出现这种不贴壁的问题
拜托各位集思广益,细胞实验已经为了这个不贴壁的问题停滞快2周,心急如焚啊,拜托各位!
1、移液管是准确移取一定量溶液的量器(量出式量器,符号为Ex). 它是一根细长而中间膨大的玻璃管在管的上端有一环形标线,膨大部分标有它的容积和标定时的温度.常用的移液管有10 mL、25 mL、50 mL、100mL等规格。
2、吸量管的全称是"分度吸量管",又称为刻度移液管. 它是带有分度线的量出式玻璃量器。用于移取非固定量的溶液。吸量管可分为以下四类:
(1) 规定等待时间15s的吸量管
这类吸量管零位在上,完全流出式,它的任意一分度线的容量定义为:在20℃时,从零线排放到该分度线所流出20℃水的体积(m1).当液面降到该分度线以上几毫米时,应按紧管口停止排液15s,再将液面调到该分度线。在量取吸量管的全容量溶液时,排放过程中水流不应受到限制,液面降至流液口处静止后,要等待15s,再移走吸量管。
(2) 不完全流出式吸量管。
不完全流出式吸量管均为零点在上形式,最低分度线为标称容量.这类吸量管的任一分度线相应的容量定义为:20℃时,从零线排放到该分度线所流出的20C水的体积(mL) 。
(3)完全流出式吸量管。
这类吸量管有零点在上和零点在下两种形式.其任一分度线相应的容量定义为:在20℃时,从分度线排放到流液口时所流出20℃水的体积(mL),液体自由流下,直到确定弯月面已降到流液口静止后,再脱离容器(指零点在下式);或者从零线排放到该分度线或流液口所流出20℃水的体积(指零点在上式)。
(4) 吹出式吸量管。
这类吸量管流速较快,且不规定等待时间。有零点在上和零点在下两种形式,均为完全流出式。吹出式吸量管的任意一分度线的容量定义为:在20℃时,从该分度线排放到流液口(指零点在下)所流出的或从零线排放到该分度线(指零点在上)所流出的20℃水的体积(m1)。使用过程中液面降至流液口并静止时,应随即将最后一滴残留的溶液一次吹出。
目前市场上还有一种标“快”字的吸量管,其容量精度与吹出式吸量管相近似。吹出式及快流速吸量管的精度低、流速快,适于在仪器分析实验中加试剂用,最好不用其移取标准溶液。
吸量管的其它操作方法同移液管。
将用待吸液润洗过的移液管插入待吸液面下1~2cm处用吸耳球按上述操作方法吸取溶液(注意移液管插入溶液不能太深,并要边吸边往下插入,始终保持此深度)。当管内液面上升至标线以上约1~2cm处时,迅速用右手食指堵住管口(此时若溶液下落至标准线以下,应重新吸取),将移液管提出待吸液面,并使管尖端接触待吸液容器内壁片刻后提起,用滤纸擦干移液管或吸量管下端粘附的少量溶液。(在移动移液管或吸量管时,应将移液管或吸量管保持垂直,不能倾斜) 洗净移液管,放置在移液管架上。向左转|向右转
四字原则:吸 擦 调 放
吸:用吸耳球吸取液体,四指拿移液管,食指扣于移液管上口。
擦:吸取后用滤纸擦干管壁。
调:放松食指使液体流出,调至刻度线,按紧。
放:沿器壁放入所需容器。
垂直是为了保证最后只剩下半滴时,移液管不计算在内的体积。如果移液管上没有写“吹”字,那么最后半滴可以不要。
移液管
用来准确移取一定体积的溶液的量器。移液管是一种量出式仪器,只用来测量它所放出溶液的体积。它是一根中间有一膨大部分的细长玻璃管。其下端为尖嘴状,上端管颈处刻有一条标线,是所移取的准确体积的标志。
激光共聚焦的看活细胞皿哪里买呢
想问下各位大神,本人用皿养的PC-9GR细胞突然有大片飘起,也并没有成团状飘起,求解决方法?