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GenWay/HBV Adefovir-resistant Mutants Real Time PCR Kit/GWB-LRB020/25 tests
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GenWay/HBV Adefovir-resistant Mutants Real Time PCR Kit/GWB-LRB020/25 tests
品牌 / 
GenWay
货号 / 
GWB-LRB020
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Description:

InstrumentLegend

(I)LightCycler1.0(Internalcontrolcan"tbeusedforthissystem)

(II)LightCycler2.0

(III)PE5700,MJ-Opticon&othersinglecolorsystems

(IV)ABI7000,ABI7300,ABI7500,ABI7900,ABIStepOne,StepOneplus,MJ-Opticon2,MJ-chromo4,MX3000P,MX3005P,SmartCyclerII,Rotor-Gene6000,LightCycler480,CFX96,iCycleriQ4,iCycleriQ5&othermulti-colorsystems.

 

InstrumentsCertifiedForUse

III,IV

 

Description

HBVAdefovir-resistantMutantsRealTimePCRKitisusedforthedetectionofHBVAdefovir-resistantMutantsbyusingrealtimePCRsystem,providingreliablediagnosticresultwhetherhepatitisBvirushasadefovir-resistancemutants.HepatitisBVirus,knownasHBVforshort,isaDNAvirus,whichhasastrongresistancetotheexternalenvironment.Itsrouteoftransmissionincludesbloodtransmission,iatrogenictransmission,mother-to-childtransmissionandsexualtransmission,amongwhichbloodtransmissionisthemostcommon.HBVhasamalignantnature,whichcouldbetransformedintocirrhosisorevenlivercancer.

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2018-07-16
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QPCR在实验室中已经非常普及,现在整理一些关于QPCR的相关资料上传,希望对大家有所帮助。

荧光定量PCR技术(FQ-PCR,也称为Real-timePCR)是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。



荧光定量PCR技术原理及利用.pdf(1473.28k)
实时荧光定量PCR123
小镜a浣溪沙2017-10-03
实时荧光定量PCR( realtime fluorescence quantitative PCR,RTFQ PCR) 是1996 年由美国Applied Biosystems 公司推出的一种新定量试验技术,它是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,结合相应的软件可以对产物进行分析,计算待测样品模板的初始浓度。

检测指标是:各样品的目的基因和管家基因分别进行Realtime PCR反应。PCR产物与 DNA Ladder在2%琼脂糖凝胶电泳,GoldView染色,检测PCR产物是否为单一特异性扩增条带。

原理:

PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;刚开始时, 探针结合在DNA任意一条单链上;PCR扩增时,Taq酶的5’端-3’端外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。

荧光定量PCR数据如下表,想通过GraphPadPrism5软件构建柱状图,但不知道是将2-△△Ct数据导入GraphPadPrism5软件,还是将Mean和SD导入GraphPadPrism5软件中。请大神赐教。另外Mean和SD是求的△△Ct的还是2-△△Ct的?


普通的PCR大多数是定性实验,而实时荧光定量PCR则定量和定性都可以做。应用领域也不一样,普通PCR一般应用于基因组克隆、DNA测序、RNA反转录等,而实时荧光定量PCR一般应用于mRNA表达量分析、绝对定量、蛋白表达、SNP分析、阴阳性解析等领域。不是定量PCR比PCR好,而是两者应用与不同的领域,起到了不同的作用。
荧光定量PCR较普通PCR不同的一点就是可以实时检测PCR扩增产物,从而可进行绝对定量或者相对定量。
实时荧光定量PCR技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
PCR(聚合酶链式反应)是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链,低温(经常是60°C左右)时引物与单链按碱基互补配对的原则结合,再调温度至DNA聚合酶最适反应温度(72°C左右),DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。
恒温PCR和实时荧光定量PCR的不同,是不同在实时荧光定量PCR的系统中加入了荧光染料(SYBR Green 或Taqman 探针等等)。以SYBR Green为例,这种染料可以结合在双链的DNA上,当PCR不断进行时,每一次退火生成的双链DNA也在增加,荧光染料结合也越多,荧光也越强。在机器中有一个探测荧光的探头,可以定量检测荧光的强度,转换成数值。这样就可以实时记录反映体系中DNA的反应情况。
荧光PCR更有优势,因为荧光PCR灵敏度高于恒温PCR,同样价格也高一些。
实时荧光定量PCR溶解曲线杂乱是什么原因?调退火温度有用吗?怎么能改善啊

所谓Ct值,就是最先出现超过阈值信号的那个循环数。或者说是到了第几个循环才出现超过阈值的信号。

C代表的是cycle,循环数目,T代表的是threshold,阈值。

所以表达量越少的话,需要越多的循环才能扩增出来。也就是CT值越高
般taq酶没5‘-3’外切性现些酶比TAKARAEx-Taq5‘-3’外切性主要减少错配提高保真率 再PrimerStar 另外pfu酶近用比较保真性介于ExPS间挺用扩增效率没
这个指的就是样本中原有目标DNA的数量。

在另外的一组管子中,加入已知拷贝数的DNA同时扩增,每个管子中加入的数量是不同的,但是从最小数目到最大数目的这个范围涵盖了样本中DNA拷贝数。

PCR反应完成后,把已知拷贝数DNA的量和PCR荧光Ct值制成标准曲线,再把待测样本的CT值和该标准曲线比对,就可以得到样本中的起始拷贝数了
如果你想做荧光定量PCR的根据实验思路来说应该需要一下试剂和仪器
1.模板提取(一般为RNA):Trizol、氯仿、异丙醇、无水乙醇、DEPC处理水

2.模板浓度测定:分光光度计或NanoDrop

3.逆转录:逆转录试剂盒(或者一步法试剂盒),这一步可以用普通PCR做,也可以用水域做。

4.荧光定量PCR试剂:通常有用SYBR Green Mix做的,但是这里建议你用EvaGreen做,灵敏度和平行性都要好于SYBR Green,并且如果你那是ABI或者Stratagene的PCR如果用SYBR Green还需要加一步Rox很麻烦。

5.其他:除了以上的那些还需要离心管、PCR管或板(Axygen反应比较好)、移液枪等,暂时就想到这么多。
定量检测包括总RNA提取和纯化、(可能还需要做mRNA提取和纯化)、RT、定量PCR
还需要反转录用的引物、定量PCR用的一对引物、荧光信号源(荧光染料或荧光标记的探针,看你用什么策略来做定量PCR)
报价要看你需要服务商提供什么服务,如果你只提供实验材料,要求服务商做以上全部工作,只检测一个指标(一个基因的表达水平变化),价格大约每个样品350-500元,多一个指标大约多90元。
一般至少做一组数据两个样品嘛,所以你按1000块一组样品预算吧。
定量pcr主要测的是基因的表达水平,比如不同时期 基因的表达有所差异,具体差异了多少倍,就可以使用了。
NameHBVAdefovir-resistantMutantsRealTimePCRKit
Storage-20°C
IntendedUseResearchUseOnly