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Klen Taq/PCR Enhancer Cocktail 1 GC/6.25 ml (for 500 rxns of 25 ul each)/E610
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Klen Taq/PCR Enhancer Cocktail 1 GC/6.25 ml (for 500 rxns of 25 ul each)/E610
品牌 / 
Klen Taq
货号 / 
E610
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PEC-1GC is particularly recommended for GC-rich targets amplified from purfied DNA, blood treated with heparin, citrate, or EDTA, or plasma treated with heparin.  Please refer to our PEC Comparison Page for more information and for help selecting the right PCR Enhancer Cocktail for your application.

Our family of PEC products are non-betaine based PCR enhancers specifically designed for use with inhibitory templates such as plasma, serum, whole blood, inhibitory food matrixes, plant tissue, polyphenolic samples, humic acid, bile, and feces.  In many cases amplication may be performed without DNA purification. They are highly recommended for use with our inhibiton-resistant Taq and Klentaq mutants. When used with a PEC, our enzymes can tolerate at least 25% plasma, serum, or whole blood, and as high as 80% GC content templates. PECs are efficient in conventional or real-time PCR, both in SYBR Green and TaqMan assays. PECs are compatible with most commercially available DNA polymerases, but they are not recommended for use with AmpliTaq Gold.

Catalog Number
E610
MSDS
File
SDS- PEC 1 GC
Amount
6.25 ml (for 500 rxns of 25 ul each)
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2018-07-16
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荧光定量PCR最常用的方法是DNA结合染料SYBR GreenⅠ的非特异性方法和Taqman水解探针的特异性方法,在这里主要介绍这2种方法,其它方法请参考其它荧光定量PCR资料。... 查看更多>
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QPCR在实验室中已经非常普及,现在整理一些关于QPCR的相关资料上传,希望对大家有所帮助。

荧光定量PCR技术(FQ-PCR,也称为Real-timePCR)是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。



荧光定量PCR技术原理及利用.pdf(1473.28k)
实时荧光定量PCR123
小镜a浣溪沙2017-10-03
实时荧光定量PCR( realtime fluorescence quantitative PCR,RTFQ PCR) 是1996 年由美国Applied Biosystems 公司推出的一种新定量试验技术,它是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,结合相应的软件可以对产物进行分析,计算待测样品模板的初始浓度。

检测指标是:各样品的目的基因和管家基因分别进行Realtime PCR反应。PCR产物与 DNA Ladder在2%琼脂糖凝胶电泳,GoldView染色,检测PCR产物是否为单一特异性扩增条带。

原理:

PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;刚开始时, 探针结合在DNA任意一条单链上;PCR扩增时,Taq酶的5’端-3’端外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。

荧光定量PCR数据如下表,想通过GraphPadPrism5软件构建柱状图,但不知道是将2-△△Ct数据导入GraphPadPrism5软件,还是将Mean和SD导入GraphPadPrism5软件中。请大神赐教。另外Mean和SD是求的△△Ct的还是2-△△Ct的?


普通的PCR大多数是定性实验,而实时荧光定量PCR则定量和定性都可以做。应用领域也不一样,普通PCR一般应用于基因组克隆、DNA测序、RNA反转录等,而实时荧光定量PCR一般应用于mRNA表达量分析、绝对定量、蛋白表达、SNP分析、阴阳性解析等领域。不是定量PCR比PCR好,而是两者应用与不同的领域,起到了不同的作用。
荧光定量PCR较普通PCR不同的一点就是可以实时检测PCR扩增产物,从而可进行绝对定量或者相对定量。
实时荧光定量PCR技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
PCR(聚合酶链式反应)是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链,低温(经常是60°C左右)时引物与单链按碱基互补配对的原则结合,再调温度至DNA聚合酶最适反应温度(72°C左右),DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。
恒温PCR和实时荧光定量PCR的不同,是不同在实时荧光定量PCR的系统中加入了荧光染料(SYBR Green 或Taqman 探针等等)。以SYBR Green为例,这种染料可以结合在双链的DNA上,当PCR不断进行时,每一次退火生成的双链DNA也在增加,荧光染料结合也越多,荧光也越强。在机器中有一个探测荧光的探头,可以定量检测荧光的强度,转换成数值。这样就可以实时记录反映体系中DNA的反应情况。
荧光PCR更有优势,因为荧光PCR灵敏度高于恒温PCR,同样价格也高一些。
实时荧光定量PCR溶解曲线杂乱是什么原因?调退火温度有用吗?怎么能改善啊

所谓Ct值,就是最先出现超过阈值信号的那个循环数。或者说是到了第几个循环才出现超过阈值的信号。

C代表的是cycle,循环数目,T代表的是threshold,阈值。

所以表达量越少的话,需要越多的循环才能扩增出来。也就是CT值越高
般taq酶没5‘-3’外切性现些酶比TAKARAEx-Taq5‘-3’外切性主要减少错配提高保真率 再PrimerStar 另外pfu酶近用比较保真性介于ExPS间挺用扩增效率没
这个指的就是样本中原有目标DNA的数量。

在另外的一组管子中,加入已知拷贝数的DNA同时扩增,每个管子中加入的数量是不同的,但是从最小数目到最大数目的这个范围涵盖了样本中DNA拷贝数。

PCR反应完成后,把已知拷贝数DNA的量和PCR荧光Ct值制成标准曲线,再把待测样本的CT值和该标准曲线比对,就可以得到样本中的起始拷贝数了
如果你想做荧光定量PCR的根据实验思路来说应该需要一下试剂和仪器
1.模板提取(一般为RNA):Trizol、氯仿、异丙醇、无水乙醇、DEPC处理水

2.模板浓度测定:分光光度计或NanoDrop

3.逆转录:逆转录试剂盒(或者一步法试剂盒),这一步可以用普通PCR做,也可以用水域做。

4.荧光定量PCR试剂:通常有用SYBR Green Mix做的,但是这里建议你用EvaGreen做,灵敏度和平行性都要好于SYBR Green,并且如果你那是ABI或者Stratagene的PCR如果用SYBR Green还需要加一步Rox很麻烦。

5.其他:除了以上的那些还需要离心管、PCR管或板(Axygen反应比较好)、移液枪等,暂时就想到这么多。
定量检测包括总RNA提取和纯化、(可能还需要做mRNA提取和纯化)、RT、定量PCR
还需要反转录用的引物、定量PCR用的一对引物、荧光信号源(荧光染料或荧光标记的探针,看你用什么策略来做定量PCR)
报价要看你需要服务商提供什么服务,如果你只提供实验材料,要求服务商做以上全部工作,只检测一个指标(一个基因的表达水平变化),价格大约每个样品350-500元,多一个指标大约多90元。
一般至少做一组数据两个样品嘛,所以你按1000块一组样品预算吧。
定量pcr主要测的是基因的表达水平,比如不同时期 基因的表达有所差异,具体差异了多少倍,就可以使用了。