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| Long PCR | Amplify up to 19 Kb |
|---|---|
| Direct Loading | Load directly to gel from thermocycler No additional loading buffer needed Separates into 2 colors during gel electrophoresis |
| High Performance | Higher Specificity/ Higher Yield / Higher Fidelity |
| High Fidelity | amfiFusion High Fidelity DNA Polymerase has 5'-> 3' exonuclease activity of Taq DNA Polymerase as well as the 3'-> 5' exonuclease activity of the proofreading DNA polymerase. |
amfiFusion High Fidelity PCR Master Mix combines amfiXpand Taq DNA Polymerase with high fidelity, proofreading DNA polymerase. This unique enzyme blend provides superior yields in both routine and challenging PCR. amfiFusion High Fidelity DNA Polymerase has 5’-3’ exonuclease acitivity of Taq DNA Polymeraseas well as the 3’-5’ exonuclease activity of the proofreading DNA polymerase.
amfiFusion High Fidelity DNA Polymerase increase amplication fidelity up to 6 times over Taq DNA polymerase alone and allows for amplication of longer product size up to 19Kb. amfiFusion High Fidelity PCR Master Mix includes asingle-strand DNA binding protein that is especially useful at blocking primers at lower temperatures making them unavailable for use by a polymerase. This DNA binding protein effectively blocks DNA synthesis from mis-priming events at lower temperatures.
In addition, amfiFusion High Fidelity PCR Master Mix containsred and yellow loading dyes to allow loading PCR product directly on a gel after thermal cycling, minimizing pipetting steps and providing easy visualization of sample.
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2021-09-01
Eppendorf 产品广泛应用于学术科研和商业研究机构，如制药、生物技术以及化学分析和食品行业，以及临床和环境分析实验室、法医检测和进行需要过程分析、生产及质控的工业生产实验室。 查看更多
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2021-09-09
分子诊断技术助力精准医学转化落地 查看更多
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2021-06-03
靶向化药物和个性化治疗的发展和应用，是当代医学发展的主要潮流和方向，尤其是在恶性肿瘤、自身免疫、心脑血 查看更多
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2021-09-07
数字PCR即Digital PCR（dPCR)，它是一种核酸分子绝对定量技术。相较于qPCR，数字PCR可让你能够直接数出DNA分子的个数，是对起始样品的绝对定量。... 查看更多
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2021-07-17
分子诊断领域逐渐升温 查看更多
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2021-08-16
2015 年 4 月 26 日，GE 医疗中国在四川成都隆重发布了数字化 X 射线影像系统 Brivo XR118（iDR）。该产品具备快速无创数字化升级、远程诊断、多机共享等特点，为推动基层医疗机构普放科室进行数字化升级，提升医师软实力和生产力，解决基层医疗的迫切需求带来了创新解决方案。iDR 同时也是 GE 在全球推行“协同创新”模式以来最重要的产品之一。伴随新医改持续扩容基层市 查看更多
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2021-09-04
分子诊断：精准医疗的“重要推手” 查看更多
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2021-08-17
体外诊断试剂可分为生化诊断试剂、免疫诊断试剂、分子诊断试剂、体外诊断试剂其他细分领域 （包含微量元素检测试剂、尿液诊断试剂、凝血类诊断试剂、血液学和流式细胞诊断试剂等 查看更多
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2021-07-22
西安天隆科技有限公司是一家以市场为先导、产学研科技研发为基础、追求自主品牌的创新驱动型高科技企业，公司针对医学诊断、食品安全、病原体检测和生物学医学科研等市场需求，一直专注分子诊断、核酸检测、POCT等检验仪器、医疗器械及体外诊断试剂的研发、生产和销售。 查看更多
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2021-08-29
医疗器械行业:仪器试剂一体化发展,分子诊断是IVD产业的未来,量值溯源是IVD发展的趋势 查看更多
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上海卓立生物科技有限公司在发布的数字PCR技术服务供应信息，浏览与数字PCR技术服务相关的产品或在搜索更多与数字PCR技术服务相关的内容。 查看更多
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什么是色谱系统适应性123
lai11202017-10-03
色谱分析做系统适用性试验主要是为了确定分析使用的色谱系统是有效的、适用的。系统适用性通常用四个参数来确定系统的适用性：分离度、柱效、重复性和拖尾因子。
其中分离度和柱效是二个最重要、也更具有实用意义的参数。分离度是判断两物质在一个方法中分离的程度，虽然与柱效相关，但在衡量系统适用性时，首先强调的应该是分离度，只有当色谱图中仅有一个色谱峰或测定微量成分时，规定柱效才有其特殊重要性。重复性和拖尾因子，分别对重现性和色谱峰的峰形做出了要求。重现性保证了方法的可重复性，对柱效能提出了要求，柱子老化、塌陷，拖尾因子则难以达到要求
数字PCR 和色谱分析系统及中高压层析系统提醒你：
色谱分析以分离出来时间位置来判断是何种物质，以峰的积分面积来分析其含量。色谱分析法，又称层析法。根据其分离原理，有吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱与排阻色谱等方法。 ---即是一种分析方法
色谱分析系统，是基于色谱分析法的一种分析仪器，如：液相色谱、气相色谱、离子色谱、凝胶色谱等。
其中分离度和柱效是二个最重要、也更具有实用意义的参数。分离度是判断两物质在一个方法中分离的程度，虽然与柱效相关，但在衡量系统适用性时，首先强调的应该是分离度，只有当色谱图中仅有一个色谱峰或测定微量成分时，规定柱效才有其特殊重要性。重复性和拖尾因子，分别对重现性和色谱峰的峰形做出了要求。重现性保证了方法的可重复性，对柱效能提出了要求，柱子老化、塌陷，拖尾因子则难以达到要求
数字PCR 和色谱分析系统及中高压层析系统提醒你：
色谱分析以分离出来时间位置来判断是何种物质，以峰的积分面积来分析其含量。色谱分析法，又称层析法。根据其分离原理，有吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱与排阻色谱等方法。 ---即是一种分析方法
色谱分析系统，是基于色谱分析法的一种分析仪器，如：液相色谱、气相色谱、离子色谱、凝胶色谱等。
基因检测只做常见的肺癌EGFR基因突变检测是不是也可以,其他突变123
2017-10-03
基因突变只做EGFR可以吗
3D数字PCR为精准医疗带来哪些优势 – 手机爱问123
zxn雫1522021-07-31
PCR（Polymerase Chain Reaction）技术，即聚合酶连反应，是一种扩大和复制目的片段DNA的技术，其发现对于生命科学的发展具有重要的意义。而3D数字PCR到底是什么鬼？它其实是最新出现的一款PCR仪，其具有对目的DNA分子做出绝对定量的优点，进而提供无与伦比的准确性、灵敏度。原理3D数字PCR是基于纳米流体芯片进行检测，通过一次检测，将样品分到数千个单独的PCR，检测结果部分为阳性，部分为阴性，之后进行绝对分子数统计，不需做标曲。目前可检测到2万个0.8nL的液滴（样品），能够精确的进行靶位点进行绝对定量研究。应用前景基因表达的绝对定量应用该技术，实现对DNA进行精确绝对定量，精确度可通过复制次数实现。通过准确性的进行定量检测基因，有助于临床上在治疗癌症、病毒感染等疾病作参考。同时，其具有高通量，检测速度快，成本相对低等优点，为后期精准治疗奠定基础。罕见基因的检测对于临床上的罕见的基因进行检测，不依靠参考标准，节约样本与试剂，并具有一定的精确度。3D数字PCR为液体活检提供技术支持液体活检是一种非侵入性的检测肿瘤基因及临床治疗效果的一种方法，目前可能正在开展有关3D数字PCR在在液体活检中的疗效，为后期临床提供更多可靠的指导作用。最新报道称“无创伤性肺癌检测技术即将登陆中国”。随着基因检测技术，如类似3D数字PCR技术的发展，推动我们将进入了“DNA的应用商城”这样的新时代，如23 and me、华大基因等专业的检测服务机构，提供更加专业的基因检测结果，经基因报告解读师或遗传咨询师进行通俗的解读，让我们每一个人都能够了解自己的基因，拥有自己的“生命之书”，让我们更加健康的生活。精准医疗其实本质是应用生物学信息与大数据科学的交叉发展的新型医学概念与医疗模式。对于精准医疗，重点在于“精准”，不仅仅是简单的基因测序如此简单，更需要精准的诊断与精准的治疗。
数字PCR的简介 123
三秒微笑_刹侥82021-08-08
数字PCR即Digital PCR（dPCR)，它是是一种核酸分子绝对定量技术。相较于qPCR，数字PCR可让你能够直接数出DNA分子的个数，是对起始样品的绝对定量。向左转|向右转
【旧贴整理】花了2星期系统归纳关于PCR的各位老师旧帖,与大家分...123
yyangyingy2018-01-22
常规PCR一般注意点：
1）PCR模板是关键，引物可以优化。制备模板的时候，一定要注意核酸模板的纯度和量。纯度上要避免杂质和杂蛋白质的混入，同时还要注意添加模板的量，模板很理想的话，不用加太多，加的多了，混进去的杂质机会就多了。当模板的浓度过低,比如低于100个分子时,引物和模板之间就很难发生反应.引物容易自身进行反应形成二聚体.用boosterPCR,即开始几个cycles保持primer的低浓度,保证primer:template的molarratio在107~108.以确保开始扩增的准确性.然后boostePrimer的浓度到正常的水平
2)退火温度是从55度开始.根据情况配合以Mg离子浓度进行调整.有条件的可以做grADIentpcr.退火的时间在30-60S,时间短一些可以得到更好的效果.
3）首先是你的TAQ酶要在冰上操作，以免失活（Taq酶容易失活所以冬天最容易出结果），TAQ酶使用时最好分装。再就是你的引物以及DNTP和模板操作完后一定放进冰箱，注意不要污染，PCR完成后要及时从PCR仪取出（如果你的PCR仪没有保温功能），如果你放在外面时间较长可以放－20度冰箱（尤其片段比较小时）。TAQ酶一般比较稳定,按照一般的惯例,分子生物学的东西从转运到加样,全部要在冰上操作
要注意的是,DMSO,GLYCEROL等会抑制polymerase的活性,所以需要scouting出最适的浓度.可以加入一些nonionic试剂,如Tween,Nonid,Trition之类的反过来抑制SDS.还有proteinaseK也要除干净,不然会降解polymerase.
一些高保真没的效率要远远低于Taqpolymerase,所以可能需要的酶的量也要大一些.另外,一般的情况下,变性的温度可以使用90~92度,变性的时间也可以缩短,
4)Mg离子的作用主要是dNTP-Mg与核酸骨架相互作用并能影响Polymerase的活性，一般的情况下Mg的浓度在0.5-5mM之间调整，同样要记住的是在调整了dNTPs的浓度后要相应的调整Mg离子的浓度
PCR实验中出现的问题及对策：
一、非特异性条带
原因：1>引物特异性差2>模板、引物↑;3>酶过量;4>Mg离子浓度↑;5>Tm↓;6>循环次数太多;7>被基因组DNA污染
对策：1>重设引物;2>引物、模板↓;3>减少酶量;4>Mg浓度;5>Tm适当;6>减少循环次数7>重新处理样品
具体措施:
1、Primer浓度过高，建议以0.1uM间隔递减
2、酶量过多，建议0.5U间隔递减
3、循环次数过多，建议2个循环间隔递减
4、Anneal温度过低，以1度间隔递增。不迷信文献上所谓的退火温度。摸下梯度，范围应该是Tm-10和Tm+5。一般选Tm值低5度的温度开始摸条件，很难摸出时可以使用降落PCR，普通的9600PCR仪也可以做，只是程序麻烦些。对于20个核苷酸，G+C含量约50%的引物，55℃为选择最适退火温度的起点较为理想。
5、采用Hotstart法或Coolstart法，减少从室温上升到变性温度过程中引起的Primer非特异性Annealing。简易热启动的方法是加样时最好在冰上加，当然可以做个简易冰盒，直接在94度放入样本到机器，效果不错。
6、Template量过多，Template量以20%递减。PCR模板是关键，引物可以优化。制备模板的时候，一定要注意核酸模板的纯度和量。纯度上要避免杂质和杂蛋白质的混入，同时还要注意添加模板的量，模板很理想的话，不用加太多，加的多了，混进去的杂质机会就多了。
7、Extension时间过短，30s间隔递增。
二、带微弱
1.出现的现象：扩增带时有时无，出现时与国外文献中的照片相似，不出现是则看不到或者非常弱。
2.曾用的解决方法：换过PCR中所用的试剂。甚至想到引物之间可能有二聚体等影响结果（虽然文献中及自己的实验中有时能出现很好的结果，但实在是万般无奈），把各引物单独或者两两结合进行试验，时好是坏。
3.思考：第一点，是否是管子的问题？管子的质量不是很好（为了便宜），特别是外形不是很规矩，与扩增仪上的管孔结合不紧密，又不经常加油，而原装管子则与管孔结合较紧密。是否由于此而使管内温度与实际设定温度不符呢？第二点，那么是否是变性温度较高使酶过早的失活？虽然扩增的产物很弱，但分子量是相符的，说明扩增在进行，只是产物量较少，这可能与Taq酶的活性有关.
4.最后解决：将变性温度由文献的95℃改为94℃，问题解决。以后各次扩增均得到满意的结果。
三、设立对照
设立阴性对照检测是否被基因组DNA污染。如果阴性对照的PCR结果也显示同样条带，则需要用重新处理样品。
设立阳性对照可以检测是否模板CDNA及引物有问题。
空白对照：加的是“水”——出现“区带”
待检样品：加的是“模板”——无“带”
说明：1，水被污染
2，模板阴性
四、遇到意外继续实验
PCR体系遇到停电就放在4度1天，还可以扩出来，意外时不要扔还可以做一次啊
PCR操作注意点
1、写好试剂标签
1）对于需要存放的试剂、样品，都有明确的标签，套小的密实袋，离心管上有品名、浓度、日期，在密实袋上会重复写一次；
2）实验记录上还会记下新来试剂的存放日期；
3）用成品试剂盒时，除了会在实验记录上记下某日用量多少，还会在试剂盒盖内侧标明某日用量。
2、管子放置
做大批量PCR用八连管，八连管的盖子有一端有缺口，有缺口的那段向着自己，有时碰到盖好后没有拿稳掉下来，也能准确无误的分清楚前后次序。
3、准备工作
实验之前，试剂器皿仪器都准备妥当，且在脑海中将实验目的和步骤联系起来再进行一遍对比检查，确认无误后，就快速准确的动手实验。
1）酶和dNTP最好分装．
dNTP的质量与浓度: dNTP的质量与浓度和PCR扩增效率有密切关系，dNTP粉呈颗粒状，如保存不当易变性失去生物学活性。dNTP溶液呈酸性，使用时应配成高浓度后，以1MNaOH或1MTris。HCL的缓冲液将其PH调节到7.0～7.5，小量分装，-20℃冰冻保存。多次冻融会使dNTP降解。在PCR反应中，dNTP应为50～200umol/L，尤其是注意4种dNTP的浓度要相等(等摩尔配制)，如其中任何一种浓度不同于其它几种时(偏高或偏低)，就会引起错配。浓度过低又会降低PCR产物的产量。dNTP能与Mg2+结合，使游离的Mg2+浓度降低。
2）PCR前，将枪等物品放在超净台中，用紫外照射半小时，可以破坏DNA，防止气溶胶污染等。但是，PCR不一定非要在超净台进行，如做质粒PCR就不那么严格．
3）PCR时，试剂化冻后，都稍稍振荡（手弹或者颠倒混匀），离心后再取（通常几秒钟，当转速到2000转左右关离心机）。（1）较均匀；（2）盖上沾的试剂被离下，不浪费试剂和减少污染。质粒DNA在取用之前，混匀的时间要稍长些。
4）PCR反应体系需要在冰上进行配制，以免酶失活或者核酸降解，反应用的器皿和微量离心管都需要进行严格的灭菌。
5)，两个引物可以加在一起分装或单独分装都可以.
4、预热PCR仪
上样前,预热PCR仪,对于PFU酶比较关键，先设置好PCR的程序然后再去配体系，别配好体系才想起PCR仪还没开。
5、加样：
1》、加样顺序
1）按照buffer-dNTP-引物-模板-Taq酶－水这个顺序加,不易起泡.
2）或加样顺序倒没有特别要求，只是Taq酶要注意最后加，加完就放到冰箱里或通常在冰箱里面加酶。然后按体积从大到小地一一加入.
3）或珍贵的、易引起污染的物质先加。
比如1、如果样品DNA很稀少，很宝贵，避免DNA间的污染就要首先考虑：第一步先加水，第二步就紧接着加DNA，这样加相同DNA就可以不换TIPS，又不会在DNA中污染引物等其他东西。
比如2、如果用随机引物，缓冲体系和酶就要重点保护？？？，先加它们再加引物和模板。
比如3、如果用的酶有外切活性，如PyroBest，pfu，就必需把酶放到最后加，否则他们有可能把引物都折磨得面目全非。
2》、混合加样
若做多管的PCR，可先加一起，再用枪分取
比如要做n管，就把除模板之外的其他部分按照n+1份配好，然后再分装，如：
10xbuffer5ul
dNTP4ul
引物11ul
引物21ul
taq酶1ul
ddw34ul
模板2ul
共有9个模板，就把除模板外的其他成分乘10，即buffer50ul，dNTP40ul，引物110ul，引物210ul，taq酶10ul，ddw340ul，加到一个离心管中，加盖，用力振荡使混匀（这步是必要的，否则分到各管中的体系不均匀），稍稍离心一下，然后分装至9个PCR管中，每管48ul，再依次加入模板2ul，混匀，稍稍离心，上机
3》、保证把微量的反应物加进去
1）枪头的下端紧贴液面(不要伸进去太多)，若看见有一个小水滴掉进去，证明已经加进去。不过我不赞成紧贴液面加，可能加进空气。所有的试剂都加完后，要用枪混匀，然后用手动离心机离一下，使之没有气泡，不要用手剧烈震荡tube
2）枪头不能挨到液面(加在管壁上瞬时离心)，否则使某些物质的量减少，所以我们加样的时候都采取螺旋式加样的方法，也就是加样时沿着管壁螺旋式上升，等全部加完后离心混匀，如果有气泡，用手指轻轻弹几下，气泡就没了（有时ep管内有气泡，反正p时要加温，发现最后结果相差不大），而且确保液体都在管底。
3）在用单个0.2mlPCR薄壁管做反应时，加在管壁，而不是管底，在管壁形成一个小液滴，每个小液滴都孤立存在，用手弹管壁最后离心。在加大量的药品时,如果1ml枪头一下吸满了液体,在枪头提出容器时,枪头尖端可能会存留一滴液体,很容易造成污染和浪费.我的技巧是在枪头提出容器时,将枪头放平,这样枪头尖端会有一个气泡,从而阻止了液体滴的形成!
4》、避免漏加或重复加
1）事先列出清单，准备两个冰盒.将所有的试剂放在一个冰盒上。加完的转移到另一个冰盒,加样以固定的顺序加,这样不容易弄错。
2）少量加样时，可以把试剂分别先加到EP管壁，这样不仅可以确定是否加上了试剂，还可以通过目测比较各种试剂加样是否准确；
3）加样时，将所有的试剂放在冰盒上。没加的在一侧，加完的转移到另一侧。
4）将PCR试剂放在最右边的竖排，再将EP管从左边开始横排放，在每加一种试剂后一定要将EP管挪动一排，这样就可以清楚的区分哪些管加了
5）还有如没有太大影响的话，将加完的合上盖子，没加的盖子打开。
6）泡沫（软的那种）制作了个板子，把ep管放上去，在加样时用枪尖压下
5》、准确浓度：
1）试剂完全化后再加样，浓度准确。像镁离子，融化后最后用枪头再吹打完全混匀。
2）各种酶，用之前瞬时离心一下，如果买的大包装的，最好分装一下，以避免反复冻融。
3）试剂用之前瞬时离心一下.
6》、注意枪头和枪是否结合紧密，否则误差将会很大；
7》、枪头：枪头要买好的，不然你有好枪也没用。
1）PCR模板是关键，引物可以优化。制备模板的时候，一定要注意核酸模板的纯度和量。纯度上要避免杂质和杂蛋白质的混入，同时还要注意添加模板的量，模板很理想的话，不用加太多，加的多了，混进去的杂质机会就多了。当模板的浓度过低,比如低于100个分子时,引物和模板之间就很难发生反应.引物容易自身进行反应形成二聚体.用boosterPCR,即开始几个cycles保持primer的低浓度,保证primer:template的molarratio在107~108.以确保开始扩增的准确性.然后boostePrimer的浓度到正常的水平
2)退火温度是从55度开始.根据情况配合以Mg离子浓度进行调整.有条件的可以做grADIentpcr.退火的时间在30-60S,时间短一些可以得到更好的效果.
3）首先是你的TAQ酶要在冰上操作，以免失活（Taq酶容易失活所以冬天最容易出结果），TAQ酶使用时最好分装。再就是你的引物以及DNTP和模板操作完后一定放进冰箱，注意不要污染，PCR完成后要及时从PCR仪取出（如果你的PCR仪没有保温功能），如果你放在外面时间较长可以放－20度冰箱（尤其片段比较小时）。TAQ酶一般比较稳定,按照一般的惯例,分子生物学的东西从转运到加样,全部要在冰上操作
要注意的是,DMSO,GLYCEROL等会抑制polymerase的活性,所以需要scouting出最适的浓度.可以加入一些nonionic试剂,如Tween,Nonid,Trition之类的反过来抑制SDS.还有proteinaseK也要除干净,不然会降解polymerase.
一些高保真没的效率要远远低于Taqpolymerase,所以可能需要的酶的量也要大一些.另外,一般的情况下,变性的温度可以使用90~92度,变性的时间也可以缩短,
4)Mg离子的作用主要是dNTP-Mg与核酸骨架相互作用并能影响Polymerase的活性，一般的情况下Mg的浓度在0.5-5mM之间调整，同样要记住的是在调整了dNTPs的浓度后要相应的调整Mg离子的浓度
PCR实验中出现的问题及对策：
一、非特异性条带
原因：1>引物特异性差2>模板、引物↑;3>酶过量;4>Mg离子浓度↑;5>Tm↓;6>循环次数太多;7>被基因组DNA污染
对策：1>重设引物;2>引物、模板↓;3>减少酶量;4>Mg浓度;5>Tm适当;6>减少循环次数7>重新处理样品
具体措施:
1、Primer浓度过高，建议以0.1uM间隔递减
2、酶量过多，建议0.5U间隔递减
3、循环次数过多，建议2个循环间隔递减
4、Anneal温度过低，以1度间隔递增。不迷信文献上所谓的退火温度。摸下梯度，范围应该是Tm-10和Tm+5。一般选Tm值低5度的温度开始摸条件，很难摸出时可以使用降落PCR，普通的9600PCR仪也可以做，只是程序麻烦些。对于20个核苷酸，G+C含量约50%的引物，55℃为选择最适退火温度的起点较为理想。
5、采用Hotstart法或Coolstart法，减少从室温上升到变性温度过程中引起的Primer非特异性Annealing。简易热启动的方法是加样时最好在冰上加，当然可以做个简易冰盒，直接在94度放入样本到机器，效果不错。
6、Template量过多，Template量以20%递减。PCR模板是关键，引物可以优化。制备模板的时候，一定要注意核酸模板的纯度和量。纯度上要避免杂质和杂蛋白质的混入，同时还要注意添加模板的量，模板很理想的话，不用加太多，加的多了，混进去的杂质机会就多了。
7、Extension时间过短，30s间隔递增。
二、带微弱
1.出现的现象：扩增带时有时无，出现时与国外文献中的照片相似，不出现是则看不到或者非常弱。
2.曾用的解决方法：换过PCR中所用的试剂。甚至想到引物之间可能有二聚体等影响结果（虽然文献中及自己的实验中有时能出现很好的结果，但实在是万般无奈），把各引物单独或者两两结合进行试验，时好是坏。
3.思考：第一点，是否是管子的问题？管子的质量不是很好（为了便宜），特别是外形不是很规矩，与扩增仪上的管孔结合不紧密，又不经常加油，而原装管子则与管孔结合较紧密。是否由于此而使管内温度与实际设定温度不符呢？第二点，那么是否是变性温度较高使酶过早的失活？虽然扩增的产物很弱，但分子量是相符的，说明扩增在进行，只是产物量较少，这可能与Taq酶的活性有关.
4.最后解决：将变性温度由文献的95℃改为94℃，问题解决。以后各次扩增均得到满意的结果。
三、设立对照
设立阴性对照检测是否被基因组DNA污染。如果阴性对照的PCR结果也显示同样条带，则需要用重新处理样品。
设立阳性对照可以检测是否模板CDNA及引物有问题。
空白对照：加的是“水”——出现“区带”
待检样品：加的是“模板”——无“带”
说明：1，水被污染
2，模板阴性
四、遇到意外继续实验
PCR体系遇到停电就放在4度1天，还可以扩出来，意外时不要扔还可以做一次啊
PCR操作注意点
1、写好试剂标签
1）对于需要存放的试剂、样品，都有明确的标签，套小的密实袋，离心管上有品名、浓度、日期，在密实袋上会重复写一次；
2）实验记录上还会记下新来试剂的存放日期；
3）用成品试剂盒时，除了会在实验记录上记下某日用量多少，还会在试剂盒盖内侧标明某日用量。
2、管子放置
做大批量PCR用八连管，八连管的盖子有一端有缺口，有缺口的那段向着自己，有时碰到盖好后没有拿稳掉下来，也能准确无误的分清楚前后次序。
3、准备工作
实验之前，试剂器皿仪器都准备妥当，且在脑海中将实验目的和步骤联系起来再进行一遍对比检查，确认无误后，就快速准确的动手实验。
1）酶和dNTP最好分装．
dNTP的质量与浓度: dNTP的质量与浓度和PCR扩增效率有密切关系，dNTP粉呈颗粒状，如保存不当易变性失去生物学活性。dNTP溶液呈酸性，使用时应配成高浓度后，以1MNaOH或1MTris。HCL的缓冲液将其PH调节到7.0～7.5，小量分装，-20℃冰冻保存。多次冻融会使dNTP降解。在PCR反应中，dNTP应为50～200umol/L，尤其是注意4种dNTP的浓度要相等(等摩尔配制)，如其中任何一种浓度不同于其它几种时(偏高或偏低)，就会引起错配。浓度过低又会降低PCR产物的产量。dNTP能与Mg2+结合，使游离的Mg2+浓度降低。
2）PCR前，将枪等物品放在超净台中，用紫外照射半小时，可以破坏DNA，防止气溶胶污染等。但是，PCR不一定非要在超净台进行，如做质粒PCR就不那么严格．
3）PCR时，试剂化冻后，都稍稍振荡（手弹或者颠倒混匀），离心后再取（通常几秒钟，当转速到2000转左右关离心机）。（1）较均匀；（2）盖上沾的试剂被离下，不浪费试剂和减少污染。质粒DNA在取用之前，混匀的时间要稍长些。
4）PCR反应体系需要在冰上进行配制，以免酶失活或者核酸降解，反应用的器皿和微量离心管都需要进行严格的灭菌。
5)，两个引物可以加在一起分装或单独分装都可以.
4、预热PCR仪
上样前,预热PCR仪,对于PFU酶比较关键，先设置好PCR的程序然后再去配体系，别配好体系才想起PCR仪还没开。
5、加样：
1》、加样顺序
1）按照buffer-dNTP-引物-模板-Taq酶－水这个顺序加,不易起泡.
2）或加样顺序倒没有特别要求，只是Taq酶要注意最后加，加完就放到冰箱里或通常在冰箱里面加酶。然后按体积从大到小地一一加入.
3）或珍贵的、易引起污染的物质先加。
比如1、如果样品DNA很稀少，很宝贵，避免DNA间的污染就要首先考虑：第一步先加水，第二步就紧接着加DNA，这样加相同DNA就可以不换TIPS，又不会在DNA中污染引物等其他东西。
比如2、如果用随机引物，缓冲体系和酶就要重点保护？？？，先加它们再加引物和模板。
比如3、如果用的酶有外切活性，如PyroBest，pfu，就必需把酶放到最后加，否则他们有可能把引物都折磨得面目全非。
2》、混合加样
若做多管的PCR，可先加一起，再用枪分取
比如要做n管，就把除模板之外的其他部分按照n+1份配好，然后再分装，如：
10xbuffer5ul
dNTP4ul
引物11ul
引物21ul
taq酶1ul
ddw34ul
模板2ul
共有9个模板，就把除模板外的其他成分乘10，即buffer50ul，dNTP40ul，引物110ul，引物210ul，taq酶10ul，ddw340ul，加到一个离心管中，加盖，用力振荡使混匀（这步是必要的，否则分到各管中的体系不均匀），稍稍离心一下，然后分装至9个PCR管中，每管48ul，再依次加入模板2ul，混匀，稍稍离心，上机
3》、保证把微量的反应物加进去
1）枪头的下端紧贴液面(不要伸进去太多)，若看见有一个小水滴掉进去，证明已经加进去。不过我不赞成紧贴液面加，可能加进空气。所有的试剂都加完后，要用枪混匀，然后用手动离心机离一下，使之没有气泡，不要用手剧烈震荡tube
2）枪头不能挨到液面(加在管壁上瞬时离心)，否则使某些物质的量减少，所以我们加样的时候都采取螺旋式加样的方法，也就是加样时沿着管壁螺旋式上升，等全部加完后离心混匀，如果有气泡，用手指轻轻弹几下，气泡就没了（有时ep管内有气泡，反正p时要加温，发现最后结果相差不大），而且确保液体都在管底。
3）在用单个0.2mlPCR薄壁管做反应时，加在管壁，而不是管底，在管壁形成一个小液滴，每个小液滴都孤立存在，用手弹管壁最后离心。在加大量的药品时,如果1ml枪头一下吸满了液体,在枪头提出容器时,枪头尖端可能会存留一滴液体,很容易造成污染和浪费.我的技巧是在枪头提出容器时,将枪头放平,这样枪头尖端会有一个气泡,从而阻止了液体滴的形成!
4》、避免漏加或重复加
1）事先列出清单，准备两个冰盒.将所有的试剂放在一个冰盒上。加完的转移到另一个冰盒,加样以固定的顺序加,这样不容易弄错。
2）少量加样时，可以把试剂分别先加到EP管壁，这样不仅可以确定是否加上了试剂，还可以通过目测比较各种试剂加样是否准确；
3）加样时，将所有的试剂放在冰盒上。没加的在一侧，加完的转移到另一侧。
4）将PCR试剂放在最右边的竖排，再将EP管从左边开始横排放，在每加一种试剂后一定要将EP管挪动一排，这样就可以清楚的区分哪些管加了
5）还有如没有太大影响的话，将加完的合上盖子，没加的盖子打开。
6）泡沫（软的那种）制作了个板子，把ep管放上去，在加样时用枪尖压下
5》、准确浓度：
1）试剂完全化后再加样，浓度准确。像镁离子，融化后最后用枪头再吹打完全混匀。
2）各种酶，用之前瞬时离心一下，如果买的大包装的，最好分装一下，以避免反复冻融。
3）试剂用之前瞬时离心一下.
6》、注意枪头和枪是否结合紧密，否则误差将会很大；
7》、枪头：枪头要买好的，不然你有好枪也没用。
【求助】PCR高手请进: 数字PCR引物及探针如何设计 核酸基因...123
红心柚2013-09-12
各位高手不知有没有谁用过数字PCR技术，主要是用于检测肿瘤组织或DNA样品中的位点突变和等位基因不平衡。
数字PCR基本原理如下：
想请教大神们，怎样设计INT引物、MB-red探针以及MB-green探针？
数字PCR基本原理如下：
想请教大神们，怎样设计INT引物、MB-red探针以及MB-green探针？
...与大家分享 酶切连接 核酸基因技术讨论版123
yyangyingy2021-07-24
参考体系
酶切体系（参考）：
质粒17ul
buffer2ul
酶1ul
－－－－－－－－－－37度，过夜。
酶切位点
在质粒上，所选的两个酶的酶切位点不可以靠的太近，如6bp
建议载体质粒不要用双酶切,用两次单酶切之后切胶回收.另外建议加多以下两个个步骤:
1.PCR产物的酶切片断做TA克隆,之后再酶切回收,与载体相连.
2.目的片段与载体连接之后建议先转化DH5α这些容易转化的菌株.然后筛选到的阳性克隆测序之后,提质粒,用质粒转化BL21,转化率很高.质粒不一定要新鲜提取,我的质粒放在-20度冻了大半年,作为载体完全没问题,只要确定不降解.
酶切的量、小提的质粒浓度和纯度
浓度:
根据我的实验，OD值0.5左右吧，不一定很准确。260：280通常是1.8左右。3ml菌过夜，进行小提,并没有对OD限定.小提的效果好不好主要决定于你的溶液I，II,III的质量以及你的操作手法，
特别是加溶液II时最为关键。现在有很多试剂盒既便宜效果又好，条件允许的话可以考虑购买。
琼脂糖电泳目测,不一定测OD,连接比例更重要.
质粒表达载体不用测序的，通常都是跑电泳看一下质量，然后再根据图谱选择适当的酶，看能不能够切开，如果能够切开，基本上就可以采用了。
纯度:
酶切对质粒的纯度要求高，如果蛋白和RNA去的不干净会影响酶切；
我们用于酶切的质粒的ratio值一般在1.8左右。
酶量；
在量上最好不超过酶的酶切能力，一般酶都为10U/ul,就是说酶切体系里加
1ul的酶可以在合适的温度下，1小时内消化10ugDNA，但在实际操作当中
一般酶都是过量的，而且延长了酶的作用时间，比如作用6小时。
因为酶切产物用于连接，所以我们酶切时质粒的用量尽量多，用20ul的体系
时可以如下加样，我们也有用50ul的体系切过。
回收目的片段与阳标一起进行酶切:
PCR后，电泳回收目的片断（比如玻璃奶或者一次性回收柱回收），再进行酶切。除非产物非常特异，直接酶切PCR产物效果有时不是很好，还有一般PCR体系里过量得dNTPs会影响酶切效果。酶切后，可以用标准得乙醇沉淀法沉淀酶切产物，获得高纯度得酶切产物，也即是你的黏性目断片断供后边得试验。而DNA的纯度对酶切效果是有很大的影响的。而酶切时应加个阳标(如含相应酶切位点的质粒载体)来确定酶和酶切体系是不是work的。如果这两步没问题，你的酶切肯定能顺利的。如果有阳标一起来切，容易找出问题的所在。
酶切不下
酶切这一步，本来问题不大，你严格按说明书上的要求进行就行了，包括酶量，酶切体系以及DNA的量也要按要求加入。而DNA的纯度和浓度是有必要测定的，最好OD260/280要接近2.0。DNA的量过大或是纯度太低都会影响酶切效果。万一如果无法充分酶切，但有所需要的片段，就可以根据Markers的位置回收所需片段。
因为基因组大部分是甲基化的，酶切不下来的原因一可能是内切酶活性低，或者是基因组杂质含量较高，或者盐离子浓度太高(不同的酶有不同的盐浓度).还有就是基因组酶切酶的量要求比较多，大概1ugDNA/10u酶，如果不行还可以加大量，酶量不能超过酶切体系的1/10，浓度过高里面的甘油会影响酶的活性。接头5-端是去磷酸化的，这样就可以避免接头自连，pcr结果就会有东西出来。
连接酶反应温度
空掉开低一点,一般16度连接2-3小时;
放进4度冰箱中，连接过夜，16小时
多片段连接:
将三个片断放在一起连的,效果的确不好.还是应该一个一个地连接.
连接比例
我用T载体连接PCR产物，请问片段和载体的摩尔比怎么选择连接效率好？根据什么因素来调节？有没有经验值？
一般片段：载体＝3～8：1。根据片段的大小、连接时间、温度、感受态细胞等因素来调节。经验值就是3～8：1。4度连接过夜，用新鲜制备的感受态细胞，一般可以得到很好的克隆效率。
补充一句：如果PCR产物片段比较大(>1kb)的话一般用3：1的比例，如果比较小就几百bp的话用>3：1的比例连接效率能高一些。3-10：1一般没问题.
建议仔细参看Teasy的说明书
接头处理
接头的处理和连接这一步其实是挺头疼的。建议先制备和接头两粘端连接的线性质粒分子。因为这对于你接头是否完成了磷酸化和退火处理提供了一个评价体系。你接头处理完，并通过评价，你就可以放心用了。退火时的处理一般要使用专门的annealingbuffer，否则效果不好。而对于粘端连接来说，应该问题不大，唯一担心的是能进行连接的片段太少了，影响下面的PCR扩增，所以酶切这一步是很关键的。
最后一步是高保真PCR，首先建议用Taq酶进行扩增，然后再用Pfu酶扩增，因为后者效率比较低。其实你用Taq酶如果扩出来，测序经blast/n后，如果有突变，你也完全可以根据正确的序列重新设计引物将之调出来。
注意感受态
如果还是不行，建议检查一下感受态菌的质量。
我的感觉是感受态很重要，你可以转化连接产物的同时用纯质粒转化进行感受态活性的验证，后者取1ul转化，10ul涂板，好的感受态一般要长50个菌落以上。其次是连接体系，目的片断与载体的摩尔比为3-10：1，除此，连接酶也很重要，最好不要使用储存太久的酶，建议你下次做的时候用别人的酶试一下。
转化要用空质粒作对照，保证感受态没问题，细菌一般长12到16小时就形成可见的菌落，转化后的菌落一般比为转化的菌落小一些。
酶切体系（参考）：
质粒17ul
buffer2ul
酶1ul
－－－－－－－－－－37度，过夜。
酶切位点
在质粒上，所选的两个酶的酶切位点不可以靠的太近，如6bp
建议载体质粒不要用双酶切,用两次单酶切之后切胶回收.另外建议加多以下两个个步骤:
1.PCR产物的酶切片断做TA克隆,之后再酶切回收,与载体相连.
2.目的片段与载体连接之后建议先转化DH5α这些容易转化的菌株.然后筛选到的阳性克隆测序之后,提质粒,用质粒转化BL21,转化率很高.质粒不一定要新鲜提取,我的质粒放在-20度冻了大半年,作为载体完全没问题,只要确定不降解.
酶切的量、小提的质粒浓度和纯度
浓度:
根据我的实验，OD值0.5左右吧，不一定很准确。260：280通常是1.8左右。3ml菌过夜，进行小提,并没有对OD限定.小提的效果好不好主要决定于你的溶液I，II,III的质量以及你的操作手法，
特别是加溶液II时最为关键。现在有很多试剂盒既便宜效果又好，条件允许的话可以考虑购买。
琼脂糖电泳目测,不一定测OD,连接比例更重要.
质粒表达载体不用测序的，通常都是跑电泳看一下质量，然后再根据图谱选择适当的酶，看能不能够切开，如果能够切开，基本上就可以采用了。
纯度:
酶切对质粒的纯度要求高，如果蛋白和RNA去的不干净会影响酶切；
我们用于酶切的质粒的ratio值一般在1.8左右。
酶量；
在量上最好不超过酶的酶切能力，一般酶都为10U/ul,就是说酶切体系里加
1ul的酶可以在合适的温度下，1小时内消化10ugDNA，但在实际操作当中
一般酶都是过量的，而且延长了酶的作用时间，比如作用6小时。
因为酶切产物用于连接，所以我们酶切时质粒的用量尽量多，用20ul的体系
时可以如下加样，我们也有用50ul的体系切过。
回收目的片段与阳标一起进行酶切:
PCR后，电泳回收目的片断（比如玻璃奶或者一次性回收柱回收），再进行酶切。除非产物非常特异，直接酶切PCR产物效果有时不是很好，还有一般PCR体系里过量得dNTPs会影响酶切效果。酶切后，可以用标准得乙醇沉淀法沉淀酶切产物，获得高纯度得酶切产物，也即是你的黏性目断片断供后边得试验。而DNA的纯度对酶切效果是有很大的影响的。而酶切时应加个阳标(如含相应酶切位点的质粒载体)来确定酶和酶切体系是不是work的。如果这两步没问题，你的酶切肯定能顺利的。如果有阳标一起来切，容易找出问题的所在。
酶切不下
酶切这一步，本来问题不大，你严格按说明书上的要求进行就行了，包括酶量，酶切体系以及DNA的量也要按要求加入。而DNA的纯度和浓度是有必要测定的，最好OD260/280要接近2.0。DNA的量过大或是纯度太低都会影响酶切效果。万一如果无法充分酶切，但有所需要的片段，就可以根据Markers的位置回收所需片段。
因为基因组大部分是甲基化的，酶切不下来的原因一可能是内切酶活性低，或者是基因组杂质含量较高，或者盐离子浓度太高(不同的酶有不同的盐浓度).还有就是基因组酶切酶的量要求比较多，大概1ugDNA/10u酶，如果不行还可以加大量，酶量不能超过酶切体系的1/10，浓度过高里面的甘油会影响酶的活性。接头5-端是去磷酸化的，这样就可以避免接头自连，pcr结果就会有东西出来。
连接酶反应温度
空掉开低一点,一般16度连接2-3小时;
放进4度冰箱中，连接过夜，16小时
多片段连接:
将三个片断放在一起连的,效果的确不好.还是应该一个一个地连接.
连接比例
我用T载体连接PCR产物，请问片段和载体的摩尔比怎么选择连接效率好？根据什么因素来调节？有没有经验值？
一般片段：载体＝3～8：1。根据片段的大小、连接时间、温度、感受态细胞等因素来调节。经验值就是3～8：1。4度连接过夜，用新鲜制备的感受态细胞，一般可以得到很好的克隆效率。
补充一句：如果PCR产物片段比较大(>1kb)的话一般用3：1的比例，如果比较小就几百bp的话用>3：1的比例连接效率能高一些。3-10：1一般没问题.
建议仔细参看Teasy的说明书
接头处理
接头的处理和连接这一步其实是挺头疼的。建议先制备和接头两粘端连接的线性质粒分子。因为这对于你接头是否完成了磷酸化和退火处理提供了一个评价体系。你接头处理完，并通过评价，你就可以放心用了。退火时的处理一般要使用专门的annealingbuffer，否则效果不好。而对于粘端连接来说，应该问题不大，唯一担心的是能进行连接的片段太少了，影响下面的PCR扩增，所以酶切这一步是很关键的。
最后一步是高保真PCR，首先建议用Taq酶进行扩增，然后再用Pfu酶扩增，因为后者效率比较低。其实你用Taq酶如果扩出来，测序经blast/n后，如果有突变，你也完全可以根据正确的序列重新设计引物将之调出来。
注意感受态
如果还是不行，建议检查一下感受态菌的质量。
我的感觉是感受态很重要，你可以转化连接产物的同时用纯质粒转化进行感受态活性的验证，后者取1ul转化，10ul涂板，好的感受态一般要长50个菌落以上。其次是连接体系，目的片断与载体的摩尔比为3-10：1，除此，连接酶也很重要，最好不要使用储存太久的酶，建议你下次做的时候用别人的酶试一下。
转化要用空质粒作对照，保证感受态没问题，细菌一般长12到16小时就形成可见的菌落，转化后的菌落一般比为转化的菌落小一些。
南京农业大学数字PCR仪采购中标公告123
zengyb19872021-07-26
赛默飞世尔科技中国 赛默飞世尔科技中国公司 赛默飞世尔科技中国...123
2017-10-03
环境是人类赖以生存的自然条件，包括水、土壤、空气等物质。环境中的变化会对人类的日常生活造成潜移默化的影响。
水质分析
水是生命之源，清洁的环境水质是社会可持续发展的重要目标。
>水质常规指标检测解决方案
> 化学污染物指标测试
空气质量监测
生命离不开空气。保障空气质量安全，维护公共健康是政府和个人都关心的问题。赛默飞通过先进的空气质量监测技术，操作简便和性能可靠的监测仪器，高效稳定的系统，能开展气体检测和温室气体分析。
> 环境空气质量自动系统
> 大气复合污染（灰霾）监测解决方案
> 污染源烟气连续自动监测解决方案
> 汞监测解决方案
> 温室气体解决方案
> 在线环境及流程监控
> 气溶胶及气体组分在线离子色谱监测系统
辐射测量与安全
赛默飞是全球最重要的辐射测量和安全仪器供应商之一，产品应用于核电站、国土安全、军队、辐射管理部门、环保和医疗机构、应急响应等众多领域和机构。
> 便携式多功能辐射巡测系列产品
> 分布式网络辐射监测软件系统
> 长寿命放射性核素监测
土壤和固体废弃物
土壤及固体废弃物监测是环境监测中未来的重点领域。环境污染物可在土壤中长期积累，造成持久性污染。在未来几十年内城市化进程中，固体废弃物污染造成的环境污染将是多数城市都无法回避的问题。
> 欧盟环保指令-RoHS指令和无卤分析
> 持久性有机污染物分析
> 样品前处理
服务中国空气检测40年，专利EPA认证PM2.5监测产品遍布各大城市。 保障食品安全的重要手段是在食用之前，对食物从原材料、生产到出厂都经过严格的检测和管理。优异的实验室集成服务还可高效率大批量处理样本，以低成本运营，并在保证产品质量符合法规要求的基础上，提升产量和效益。
应对食品安全领域各项挑战
> 环境污染物
> 微生物检测
> 非法添加剂
> 农药、兽药残留
> 转基因
> 重金属
> 食品原产地与等级区分
> 食品重属鉴别
> 食品掺杂分析
> 危害分析与关键控制点管理
> 食品中非目标物筛查……
食品安全检测方法屡获“技术创新大奖”
食品安全快速响应中心快速响应15个食品安全危机事件。 赛默飞致力于生命科学领域的技术创新，带来更好的科学成果。
生命科学是研究生命现象、生命活动的本质、特征和发生、发展规律，以及各种生物之间和生物与环境之间相互关系的科学。
遗传分析
从金级标准的Sanger测序到简单、可扩展的Ion Torrent二代测序，优化的应用、优质的耗材以及简化的解决方案实现快速、准确且经济的结果。
基因检测与功能分析
汇集核酸分析领域的顶级品牌，包括定量PCR、数字PCR技术、克隆、反转录与基因调控产品，RNA研究领域的翘楚产品。
蛋白质功能分析
包括创新化学试剂、高效分离产品、领先色谱质谱技术，以及蛋白质组学数据处理软件，能更有信心地面对蛋白质研究的挑战。
细胞培养与分析
Ion Torrent测序仪在超过90份同行出版物被引用，是出版物中引用频率较高的台式测序。
医疗健康
研制各种专业诊断的仪器和试剂，实验室常规设备和耗材，以及各种医学研究用的先进平台与产品、
病理诊断
从常规病理检测，到数字病理分析，再到分子病理诊断。针对病理 实验室特殊环境需求及高负荷工作需求，一流的仪器设备耗材，流程设计及工作优化方案，帮助病理工作者更安全，高效地完成诊断，同 时提高诊断准确率。
感染诊断
涵盖各类型培养基、血培养系统、微生物鉴定、 药敏检测，以及降钙素原检测、PCR、qPCR、测序等系列产品，可帮助临床医生作出早期感染诊断、控制感染、指导抗生素合理使用、监测治疗和疾病 预后。
过敏诊断
过敏原自身免疫疾病诊断设备与试剂采用抗原包被技术、高特异性和高稳定性，被誉为过敏原检测的金标准。
移植诊断
通过移植前对受体/供体的组织相容性抗原（HLA）的配型、相关特异性抗体以及非HLA因素的一系列检测，为移植前 准确筛选供体、移植后有效预防抗体介导性排斥反应提供科学准确的依据，提高移植手术成功率。
转化医学研究
在转化医学领域，产品和技术广泛应用于从细胞到蛋白组学，再到基因组学的研究，加速生物标记物用于伴随诊断及个体化医疗 医药产业是一个国家国民经济的重要组成部分，与国民生命健康和生活质量等利益密切相关。
赛默飞专注制药生产的每个环节。
> 研究阶段
- 基础研究 靶标发现 药物设计
- 基因功能分析
- 蛋白质分析
- 细胞培养分析
- 化合物分析和筛选
> 技术市场化阶段
- 预临床研究 一期临床 两期临床 三期临床
- 临床前评价
- 临床试验
> 生产上市阶段
- 药物生产 药物上市 四期临床
- 大规模生产
- 过程控制
- 质检和质控
- 大规模临床试验
中医药现代化整体解决方案
中医药是中华文明长期发展中积累下的宝贵财富，其有效的实践和丰富的知识中蕴含了深厚的科学内涵。
生物仿制药解决方案
在快速发展的生物仿制药领域，用简单、可靠的解决方案，提供安全的产品，最大限度缩短上市所需时间。 除医疗、生物制药、食品安全和环境还有法医行业外，赛默飞的产品与技术也在众多工业行业得到广泛应用，服务生活及工业制造的方方面面，满足各行各业的需求。
石油化工
从石化上游的原油开采、输送、炼油和乙烯生产，到下游合成材料、精细化工、橡胶加工等完整的产业体系，解决石油化工行业各业务环节中的实际问题。
> 石油炼制 > 天然气加工
> 石油产品分析 > 精细化工
> 化石生产 > 生物柴油
> 化工产品
钢铁
从材料处理到金属加工再到最终产品监控，在线及实验室的严苛金属分析，改善工作流程，提供优异的元素分析产品和服务。
> 原料处理 > 冷轧
> 炼钢 >钢加工
> 热轧 > 中心监测站
水泥
独一无二的创新技术为整个水泥加工流程提供了综合解决方案，兼顾原材料、能耗、替代性燃料使用和添加剂优化。其中具 有可靠、耐用、紧密和高性价比的分析技术，可为从小型水泥生产厂，到大规模生产研磨站的众多客户提供服务。综合的化学和包括游离氧化钙在内的物想分析， 在线确保更优的简仓控制。
能源
科学家和工程师对前沿能源相关重要材料的化学、结构和性能间相互作用实现控制。
> 燃料电池
> 发电厂
> 太阳能
机电
伴随微电子和半导体器件制作尺寸的越来越小，使用元素和化合物种类的不断增加，由此产生了一系列复杂的材料问题，为材料工程师带来了更严峻的挑战。对于这一蓬勃发展的行业，市场上并不存在有一项能够完全满足所有相关材料分析的技术。
材料
材料科学家和工程师研究和开发先进的涂料和涂层、陶瓷和玻璃、纸张和油墨等众多材料，实现对包括塑模、文物、印刷、光学部件、汽车组件等在内应用的提升。
水质分析
水是生命之源，清洁的环境水质是社会可持续发展的重要目标。
>水质常规指标检测解决方案
> 化学污染物指标测试
空气质量监测
生命离不开空气。保障空气质量安全，维护公共健康是政府和个人都关心的问题。赛默飞通过先进的空气质量监测技术，操作简便和性能可靠的监测仪器，高效稳定的系统，能开展气体检测和温室气体分析。
> 环境空气质量自动系统
> 大气复合污染（灰霾）监测解决方案
> 污染源烟气连续自动监测解决方案
> 汞监测解决方案
> 温室气体解决方案
> 在线环境及流程监控
> 气溶胶及气体组分在线离子色谱监测系统
辐射测量与安全
赛默飞是全球最重要的辐射测量和安全仪器供应商之一，产品应用于核电站、国土安全、军队、辐射管理部门、环保和医疗机构、应急响应等众多领域和机构。
> 便携式多功能辐射巡测系列产品
> 分布式网络辐射监测软件系统
> 长寿命放射性核素监测
土壤和固体废弃物
土壤及固体废弃物监测是环境监测中未来的重点领域。环境污染物可在土壤中长期积累，造成持久性污染。在未来几十年内城市化进程中，固体废弃物污染造成的环境污染将是多数城市都无法回避的问题。
> 欧盟环保指令-RoHS指令和无卤分析
> 持久性有机污染物分析
> 样品前处理
服务中国空气检测40年，专利EPA认证PM2.5监测产品遍布各大城市。 保障食品安全的重要手段是在食用之前，对食物从原材料、生产到出厂都经过严格的检测和管理。优异的实验室集成服务还可高效率大批量处理样本，以低成本运营，并在保证产品质量符合法规要求的基础上，提升产量和效益。
应对食品安全领域各项挑战
> 环境污染物
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> 非法添加剂
> 农药、兽药残留
> 转基因
> 重金属
> 食品原产地与等级区分
> 食品重属鉴别
> 食品掺杂分析
> 危害分析与关键控制点管理
> 食品中非目标物筛查……
食品安全检测方法屡获“技术创新大奖”
食品安全快速响应中心快速响应15个食品安全危机事件。 赛默飞致力于生命科学领域的技术创新，带来更好的科学成果。
生命科学是研究生命现象、生命活动的本质、特征和发生、发展规律，以及各种生物之间和生物与环境之间相互关系的科学。
遗传分析
从金级标准的Sanger测序到简单、可扩展的Ion Torrent二代测序，优化的应用、优质的耗材以及简化的解决方案实现快速、准确且经济的结果。
基因检测与功能分析
汇集核酸分析领域的顶级品牌，包括定量PCR、数字PCR技术、克隆、反转录与基因调控产品，RNA研究领域的翘楚产品。
蛋白质功能分析
包括创新化学试剂、高效分离产品、领先色谱质谱技术，以及蛋白质组学数据处理软件，能更有信心地面对蛋白质研究的挑战。
细胞培养与分析
Ion Torrent测序仪在超过90份同行出版物被引用，是出版物中引用频率较高的台式测序。
医疗健康
研制各种专业诊断的仪器和试剂，实验室常规设备和耗材，以及各种医学研究用的先进平台与产品、
病理诊断
从常规病理检测，到数字病理分析，再到分子病理诊断。针对病理 实验室特殊环境需求及高负荷工作需求，一流的仪器设备耗材，流程设计及工作优化方案，帮助病理工作者更安全，高效地完成诊断，同 时提高诊断准确率。
感染诊断
涵盖各类型培养基、血培养系统、微生物鉴定、 药敏检测，以及降钙素原检测、PCR、qPCR、测序等系列产品，可帮助临床医生作出早期感染诊断、控制感染、指导抗生素合理使用、监测治疗和疾病 预后。
过敏诊断
过敏原自身免疫疾病诊断设备与试剂采用抗原包被技术、高特异性和高稳定性，被誉为过敏原检测的金标准。
移植诊断
通过移植前对受体/供体的组织相容性抗原（HLA）的配型、相关特异性抗体以及非HLA因素的一系列检测，为移植前 准确筛选供体、移植后有效预防抗体介导性排斥反应提供科学准确的依据，提高移植手术成功率。
转化医学研究
在转化医学领域，产品和技术广泛应用于从细胞到蛋白组学，再到基因组学的研究，加速生物标记物用于伴随诊断及个体化医疗 医药产业是一个国家国民经济的重要组成部分，与国民生命健康和生活质量等利益密切相关。
赛默飞专注制药生产的每个环节。
> 研究阶段
- 基础研究 靶标发现 药物设计
- 基因功能分析
- 蛋白质分析
- 细胞培养分析
- 化合物分析和筛选
> 技术市场化阶段
- 预临床研究 一期临床 两期临床 三期临床
- 临床前评价
- 临床试验
> 生产上市阶段
- 药物生产 药物上市 四期临床
- 大规模生产
- 过程控制
- 质检和质控
- 大规模临床试验
中医药现代化整体解决方案
中医药是中华文明长期发展中积累下的宝贵财富，其有效的实践和丰富的知识中蕴含了深厚的科学内涵。
生物仿制药解决方案
在快速发展的生物仿制药领域，用简单、可靠的解决方案，提供安全的产品，最大限度缩短上市所需时间。 除医疗、生物制药、食品安全和环境还有法医行业外，赛默飞的产品与技术也在众多工业行业得到广泛应用，服务生活及工业制造的方方面面，满足各行各业的需求。
石油化工
从石化上游的原油开采、输送、炼油和乙烯生产，到下游合成材料、精细化工、橡胶加工等完整的产业体系，解决石油化工行业各业务环节中的实际问题。
> 石油炼制 > 天然气加工
> 石油产品分析 > 精细化工
> 化石生产 > 生物柴油
> 化工产品
钢铁
从材料处理到金属加工再到最终产品监控，在线及实验室的严苛金属分析，改善工作流程，提供优异的元素分析产品和服务。
> 原料处理 > 冷轧
> 炼钢 >钢加工
> 热轧 > 中心监测站
水泥
独一无二的创新技术为整个水泥加工流程提供了综合解决方案，兼顾原材料、能耗、替代性燃料使用和添加剂优化。其中具 有可靠、耐用、紧密和高性价比的分析技术，可为从小型水泥生产厂，到大规模生产研磨站的众多客户提供服务。综合的化学和包括游离氧化钙在内的物想分析， 在线确保更优的简仓控制。
能源
科学家和工程师对前沿能源相关重要材料的化学、结构和性能间相互作用实现控制。
> 燃料电池
> 发电厂
> 太阳能
机电
伴随微电子和半导体器件制作尺寸的越来越小，使用元素和化合物种类的不断增加，由此产生了一系列复杂的材料问题，为材料工程师带来了更严峻的挑战。对于这一蓬勃发展的行业，市场上并不存在有一项能够完全满足所有相关材料分析的技术。
材料
材料科学家和工程师研究和开发先进的涂料和涂层、陶瓷和玻璃、纸张和油墨等众多材料，实现对包括塑模、文物、印刷、光学部件、汽车组件等在内应用的提升。
lyncee数字全息显微镜—动态3D细胞显微镜性能参数,报价/价格,图片...123
yaoyaotutu01022021-08-02
在科学研究中细胞培养等技术已是相当成熟，可对细胞的状态完全无保留的呈现给研究者是一直以来的难点。不过，现在一种新的成像技术的出现，给研究者们带来了曙光，那就是全息成像技术，前期这种技术大多应用在摄影方面，目前瑞典Phiab公司采用这种全息技术新开发出HoloMonitorTMM4激光全息成像及分析系统，成功将这种高新技术应用到生命科学领域。
那这位新晋之主能为我们带来哪些惊喜呢？
1，长期、非侵入性细胞检测
M4是采用物理干涉成像技术，实现了对细胞非侵入、无标记性的观察，最大程度地体现细胞的真实状态，并可以排除实验处理的假阳性。在系统的分析软件中，可以对观察细胞实现3D重建，并对图片添加伪彩，增加细胞与背景的对比度，让你实验图片焕然多彩，不再只是黑或白。
2，细胞追踪
M4可以对细胞进行长时间延时拍摄，实现细胞边培养边拍摄，自动记录细胞的运动性。目前在许多科学研究中，细胞运动性，细胞迁移率是判断细胞敏感性的重要指标，在M4系统中不仅可以获得细胞长时间的形态上的直观图片，同时，分析软件中的Trackcells可以给予单细胞，多细胞的运动轨迹，迁移方向，迁移距离等多种数据，避免了你在实验之后的数据统计和数据分析过程，真可谓是省时省力。
3，数量统计
M4分析系统中采用细胞分割识别的方法，可以进行多种统计方法的细胞识别。（也可以进行手动调节哦！）根据采集图像区域与培养皿体积的相关性，对整个培养皿的细胞数量进行统计。除此之外，系统会自动生成任一细胞参数的数量统计柱形图，比如细胞体积的柱状图即不同细胞体积下的细胞数量分布。
4，形态学分析
形态学分析是M4系统中相当强大的功能。无论是实时成像还是延时成像，对图片中每个细胞的各个形态参数都有记录，如：体积、面积、最大厚度、平均厚度、周长、不规则度等。软件中Analyzecell可以对细胞参数之间的相互关系及细胞的分布情况直接输出散点图，研究者同时可以对散点图进行标记，记录实验所需的实验分析区域。并对每个区域又仅进行细胞形态学及统计学分析。该功能对细胞增殖、细胞凋亡、细胞周期等领域有很好的应用。
5，数据输出
M4不仅可以输出图片也可以对延时拍摄图片制作成视频进行输出，更加直观的对细胞形态及细胞活动进行观察，为你的科研汇报更添佐证。
HoloMonitorTMM4激光全息成像及分析系统利用全息技术将细胞的每个点都几录下来，每个全息图中包含了图像中的全部数据，对于科研要求越来越严格的研究人员来讲，这无疑是细胞生物学的一个新的里程碑。
HoloMonitorTMM4激光全息成像及分析系统已经应用到了许多生命科学研究方面，如肿瘤侵袭与转移、细胞耐药性、纳米微阵列、混合纳米聚合物胶束、细胞周期、细胞增殖、细胞分化、细胞凋亡、神经细胞观察等。目前研究者仍在挖掘M4的更多技术，更多应用、更多创新。
《数字化卒中单元管理系统》(数据库)网络版的研究与开发下载_在线...123
yzhzcl2021-08-06
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正式单机版1万元
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《数字化卒中单元管理系统》单机试用版本
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3.第一次登陆系统，用户名为：admin密码：123，然后以管理员身份添加不同工作人员，以便于行使不同的职责。
4.检查报告仍然以“北京天坛医院神经内科”为表头,这也是保护版权的一种办法，请大家谅解。
5.试用版本可以添加96名患者，如果超过，试用期结束。如还需要本软件，请于天坛医院神经内科联系，mailto：yzh@bjtth.com。
6.试用版本数据储存于安装目录下的dsu.mdb文件内，如果以后想安装网络版本，试用期内的患者资料不能进入网络版的数据库。
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5。不同的用户只能进行自己责任的操作，而对于其他职能的工作你只能看到，不能修改。
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数字PCR技术的发展和应用.pdf123
炎儿丶WEU2021-07-30
20 世纪末，Vogelstein 等提出数字PCR( digitalPCR，dPCR) 的概念，通过将一个样本分成几十到几万份，分配到不同的反应单元，每个单元包含一个或多个拷贝的目标分子( DNA 模板) ，在每个反应单元中分别对目标分子进行PCR 扩增，扩增结束后对各个反应单元的荧光信号进行统计学分析。
数字PCR技术不断发展，Bio-Rad、LIFE Technologies及RainDance等厂家相继推出技术较为成熟的数字PCR产品。
QuantaLife公司开发出的微滴数字PCR技术。该产品还获得了2011年度Frost & Sullivan北美新产品创新奖。2011年10月，Bio-Rad公司收购了QuantaLife和ddPCR技术，相继推出了QX100、QX200微滴式数字PCR系统。
与其他数字PCR技术不同，Bio-Rad对样品进行微滴化处理。据该公司基因表达部门的销售经理Richard Kurtz介绍，他们的独特优势是能够产生非常均一、重复的1纳升液滴。这样的好处是每个样品形成20,000个液滴，而其他系统只能分成760-3,000个部分。分得越多，则意味着分析越准确。
数字PCR是一种核酸分子绝对定量技术。当前核酸分子的定量有三种方法，光度法基于核酸分子的吸光度来定量；实时荧光定量PCR（Real Time PCR）基于Ct值，Ct值就是指可以检测到荧光值对应的循环数；数字PCR是最新的定量技术，基于单分子PCR方法来进行计数的核酸定量，是一种绝对定量的方法。主要采用当前分析化学热门研究领域的微流控或微滴化方法，将大量稀释后的核酸溶液分散至芯片的微反应器或微滴中，每个反应器的核酸模板数少于或者等于1个。这样经过PCR循环之后，有一个核酸分子模板的反应器就会给出荧光信号，没有模板的反应器就没有荧光信号。根据相对比例和反应器的体积，就可以推算出原始溶液的核酸浓度。向左转|向右转
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QuantaLife公司开发出的微滴数字PCR技术。该产品还获得了2011年度Frost & Sullivan北美新产品创新奖。2011年10月，Bio-Rad公司收购了QuantaLife和ddPCR技术，相继推出了QX100、QX200微滴式数字PCR系统。
与其他数字PCR技术不同，Bio-Rad对样品进行微滴化处理。据该公司基因表达部门的销售经理Richard Kurtz介绍，他们的独特优势是能够产生非常均一、重复的1纳升液滴。这样的好处是每个样品形成20,000个液滴，而其他系统只能分成760-3,000个部分。分得越多，则意味着分析越准确。
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