Alpha-thrombin is a highly specific serine protease generated by proteolytic activation of the zymogen prothrombin (1). During coagulation, thrombin cleaves fibrinogen to form fibrin, leading to the ultimate step in coagulation, the formation of a fibrin clot. Thrombin is also responsible for feedback activation of the procofactors factor V and factor VIII. Thrombin has also been reported to activate factor XIII and platelets, and also functions as a vasoconstrictor protein. The procoagulant activity of thrombin is arrested in two ways: 1) inhibition by either heparin cofactor II or the antithrombin III/heparin complex; or 2) complex formation with thrombomodulin. Formation of the thrombin/thrombomodulin complex results in the inability of thrombin to cleave fibrinogen and activate factors V and VIII, but increases the efficiency of thrombin for activation of the anticoagulant, protein C.
Thrombin is a two chain enzyme composed of an NH2-terminal "A" chain (Mr=6,000) and a COOH-terminal "B" chain (Mr=31,000) which remain covalently associated through a single disulfide bond. Human thrombin is 13 amino acids shorter than the bovine thrombin due to a thrombin cleavage site on the human protein that is not present in the bovine protein.
Thrombin is also utilized for site specific cleavage of fusion proteins expressed in bacteria (9-11). A thrombin sensitive site is incorporated between the recombinant protein of interest and peptides or proteins which facilitate purification and/or expression. The target protein is released from the expressed hybrid by cleavage with thrombin. Thrombin can then be easily removed by affinity chromatography.
Human, bovine and mouse thrombin are prepared from purified prothrombin using a modification of the Lundblad procedure (1) as described by Nesheim et al. (2). Thrombin is supplied in 50% (vol/vol) glycerol/H2O and should be stored at -20oC. Purity is determined by SDS-PAGE analysis and activity is measured in a thrombin specific clotting assay, and compared to standardized NIH thrombin. Thrombin is also available with the active site blocked with either DFP, FPRck, or biotinlyated FPRck.
Cleavage of Fusion ProteinsIn addition to its broad application in coagulation research thrombin can be used for site specific cleavage of fusion proteins. A thrombin sensitive site is incorporated between the recombinant protein of interest and peptides or proteins which facilitate purification and/or expression. The target protein is released from the expressed hybrid by cleavage with thrombin. Thrombin can then be easily removed by affinity chromatography. Lot to lot consistency ensures reproducible results every time. For experiments involving cell cultures, please contact us to discuss custom, low endotoxin lots designated for cell culture use.
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葡萄糖激酶是调节人体血液中葡萄糖水平的重要酶，主要作用是监控血中的葡萄糖水平。临床上，由于葡萄糖激酶过度激活或者失活，导致血液中葡萄糖水平过低或过高，继而引发2型糖尿病和高血糖症病变。因此，以葡萄糖激酶为靶标的抗糖尿病研发引起了各界的广泛关注。对于葡萄糖激酶临床突变研究和以葡萄糖激酶为靶标的药物开发来说，靶标自身功能机制的阐述是亟需解决的重要问题之一。由于葡萄糖激酶催化葡萄糖磷酸化时需要大规模的构象变化，现有的实验方法还不能有效地检测这些变化，同时葡萄糖激酶-ATP-葡萄糖三元复合物晶体结构很难测定。在葡萄糖激酶—构机制研究的基础上(PNAS 2006, 103, 13368-13373)，蒋华良研究员带领研究生张健等综合利用计算生物学和分子生物学方法，对葡萄糖催化的机制进行了深入系统的研究。采用分子模拟和分子动力学方法在构建了葡萄糖激酶-ATP-葡萄糖三元复合物的三维结构，获得了精确的葡萄糖激酶的催化反应环境，发现了与葡萄糖激酶催化活性密切相关的一系列重要残基，其中Lys169残基在底物ATP和葡萄糖的结合中发挥决定性作用，首次合理地解释了临床上常见的K169N缺陷型葡萄糖激酶突变体的分子机理。与沈旭研究员课题组合作，用分子生物学实验和酶动力学学分析方法验证了理论计算结果(这部分工作主要由黎陈静完成)。该研究为进一步开展临床上缺陷型葡萄糖激酶突变体的治疗以及设计抗糖尿病药物提供了重要信息，也是上海药物所药物发现与设计中心用理论计算与实验相结合的方法研究生物学问题的又一成功案例
酪氨酸激酶可分为三类：①受体酪氨酸激酶，为单次跨膜蛋白，在脊椎动物中已发现50余种；②胞质酪氨酸激酶，如Src家族、Tec家族、ZAP70家族、JAK家族等；③核内酪氨酸激酶如Abl和Wee。
根据PTK是否存在于细胞膜受体可将其分成受体型和非受体型。向左转|向右转
为什么有的书籍（葛均波院士参与编写的指南）强烈要求溶栓前必须肝素化，不管是特异性的溶栓药还是非特异性的，包括尿
激酶，意即，先静推肝素，然后滴尿激酶，之后继续每小时维持使用肝素。请高人回答，谢谢。
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激酶是一类生物化学里的分子，从高能供体分子（如ATP）转移磷酸基团到特定靶分子（底物）的酶，这一过程谓之磷酸化。最大的激酶族群是蛋白激酶。 蛋白激酶作用于特定的蛋白质，并改变其活性。这些激酶在细胞的信号传导及其复杂的生命活动中起到了广泛的作用。其他不同的激酶作用于小分子物质（脂质、糖、氨基酸、核苷等等），或者为了发出信号，或者使它们为代谢中各种生化反应作好准备。
蛋白酶
protease
水解蛋白质肽键的一类酶的总称。按其水解多肽的方式，可以将其分为内肽酶和外肽酶两类。内肽酶将蛋白质分子内部切断，形成分子量较小的月示和胨。外肽酶从蛋白质分子的游离氨基或羧基的末端逐个将肽键水解，而游离出氨基酸，前者为氨基肽酶后者为羧基肽酶。按其活性中心和最适pH值，又可将蛋白酶分为丝氨酸蛋白酶、巯基蛋白酶、金属蛋白酶和酸性蛋白酶。按其反应的最适pH值，分为酸性蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶。工业生产上应用的蛋白酶，主要是内肽酶。
蛋白激酶
protein kinase
又称蛋白质磷酸化酶(protein phosphakinase)。一类催化蛋白质磷酸化反应的酶。
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激酶能否被血液
透析所清除，目前查了一些文献，找不到具体的。长期导管存在血栓形成和纤维套鞘，有时候常规尿激酶封管、尿激酶溶栓效果可能不佳，在透析中出现血流不足，可否边透析边滴注......
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