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细胞增殖检测技术-- BrdU法_雄成状
2025-11-16
BrdU（5-溴脱氧尿嘧啶核苷）法检测细胞增殖原理：BrdU是胸腺嘧啶的衍生物，常用于标记活细胞中新合成的DNA，（1）细胞以1.5 105 /ml细胞数接种于直径35mm培养皿中（内放置一盖玻片），培养1 d，用含0.4％FBS培养液同步化3 d，使绝大多数细胞处于G期。（2）加入BrdU（储液：1.0 mg/ml,终浓度为0.03μg/ml），37 ，孵育40min。（3）弃培养液，玻片用PBS洗涤3次。（4）甲醇/醋酸固定10 min。（5）经固定的玻片空气干燥，0.3％H2O2 -甲醇30min灭活内源性氧化酶。（6）5％正常兔血清封闭。（7）甲酰胺100 ，5 min变性核酸。（8）冰浴冷却后PBS洗涤，加1抗即抗小鼠BrdU单抗（工作浓度1：50），阴性对照加PBS或血清。（9）按ABC法进行检测，苏木素或伊红衬染，在显微镜下随机计数10个高倍视野中细胞总数及BrdU阳性细胞数，计算标记指数（LI）。1.BrdU配制方法：10mg溶于10 ml双蒸水，4 下避光保存2.BrdU会肌体造成不可逆损伤，使用时注意安全，避免吸入BrdU粉尘。订购产品信息：
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