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一含Trc启动子的质粒(该质粒之前是pET系列的,启动子是T7启动子,我用双酶切将T7启动子改为Trc启动子【参照pProExHTa】,RBS区域也改成了pProExHTa中的RBS,测序正确),转到Top10里加入IPTG后没有表达(T7启动子的时候该质粒在BL21里表达量很高)
不知道是质粒构建问题还是TOP10本身不可以作为表达菌株?
看过Top10的基因型,F-的,而Trc启动子是大肠杆菌内源RNA聚合酶可以识别的,所以理论上讲,加入IPTG就应该有表达的。
想问一下有没有做过类似试验的园友给介绍一下经验
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