细胞转染的类型及方法
转染（Transfection）是指将DNA或者RNA导入真核细胞中的过程。转染的目的是产生重组蛋白，或特异性增强或抑制转染细胞中的基因表达。细胞转染有哪些类型和方法呢？
1）根据导入的核酸存在于宿主细胞的时间长短，可以分为瞬转和稳转。
稳转
导入的DNA没有整合到基因组中，而是保留在细胞核上
导入的DNA整合到基因组中
导入的遗传物质不传递到子代；遗传改变只是暂时的
导入的遗传物质能够代代相传；遗传改变是永久的
不需要选择性筛选
需要选择性筛选出稳定转染的细胞
DNA载体和RNA都可用于瞬时转染
只有DNA载体可用于稳定转染；RNA本身不能稳定地导入细胞中
导入的遗传物质的高拷贝数导致高水平的蛋白质表达。
单拷贝数或低拷贝数的稳定整合的DNA导致较低水平的蛋白质表达。
通常在转染后24-96小时内收获细胞。
需要2-3周的时间筛选出稳定转染的细胞克隆。
通常不适合使用具有诱导型启动子的载体的研究。
适用于使用带有诱导型启动子的载体的研究。
2）根据转染方式可以分为化学，生物，物理方法。
| 转染类型 |
| 化学转染法 |
| 生物转入法 |
| 物理转染法 |
二、脂质体转染法 1、材料 293T细胞、MyoD表达质粒和EGFP表达质粒、DMEM培养基、链霉素/青霉素(双抗)、FCS(小牛血清)、PBS(磷酸盐缓冲溶液)、胰酶/EDTA消化液、转染试剂(TransFast) 2、器材 20ul/200ul/1ml微量移液器和Tip头酒精灯、废液缸、血球计数板、涡旋振荡器、恒温水浴箱、台式离心机、35mm培养皿、转染管、15ml离心管、观察用倒置显微镜荧光显微镜和CCD 3、实验步骤 细胞传代 (1)试验准备：200ul/1mlTip头各一盒(以上物品均需高压灭菌)，酒精棉球，废液缸，试管架，微量移液器，记号笔，培养皿，离心管。 (2)弃掉培养皿中的培养基，用1ml的PBS溶液洗涤两次。 (3)用Tip头加入1mlTrypsin液，消化1分钟(37。C，5%CO2)。用手轻拍培养瓶壁，观察到细胞完全从壁上脱落下来为止。 (4)加入1ml的含血清培养基终止反应。 (5)用Tip头多次吹吸，使细胞完全分散开。 (6)将培养液装入离心管中，1000rpm离心5min。 (7)用培养液重悬细胞，细胞计数后选择0.8X106个细胞加入一个35mm培养皿。 (8)将合适体积完全培养液加入离心管中，混匀细胞后轻轻加入培养皿中，使其均匀分布。 (9)将培养皿转入CO2培养箱中培养，第二天转染。
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