StressMarq硫黄素T测定
硫黄素T是一种荧光染料,可与富含β片层的结构(例如α突触核蛋白原纤维中的结构)结合。结合后,染料的发射光谱发生红移并增加了荧光强度。以下方案用于使用α突触核蛋白预制的原纤维和单体生成硫黄素T测定法。
准备dH2O中的1mM硫黄素T储备溶液(新鲜制备,并通过0.2μm注射器过滤器过滤)。
在PBS pH 7.4中稀释硫黄素T,使每孔中硫黄素T的最终浓度为25μM(每孔体积= 100μL)。板:Lumox 96多孔板(Sarstedt目录号94.6000.024)。
使用前在室温下解冻α-突触核蛋白等分试样。
将10μM预制纤维或100μM单体(或两者)添加到适当的孔中。用移液器上下吸取混合液。浓度是估算值,需要进行优化以给出良好的信号而不会造成浪费。
密封板并置于37°C的振荡培养箱(600 rpm)中。
使用Softmax Pro软件6.5.1版在Molecular Devices Gemini XPS微孔板读取器上测量荧光。
XPS微孔板读取器设置:
温度:37°C
读取类型:阱扫描
波长:450 nm处的激发和485 nm
PMT 处的发射增益:
每次读取自动闪烁:6次
摇动:读取前20秒
7.重新密封板并放入37°C的振荡培养箱中。
8.定期从1到72小时获取读数。
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