Genovis抗体亚单位切割酶
抗体亚单位切割酶
在体内外细胞或组织实验中,全抗体中由于Fc保守片段的存在可能导致许多意想不到的结果,因此单一的特异性片段F(ab’)2或 Fab 将可能获得zui佳实验结果。常规获取单一F(ab’)2 或 Fab片段的方法为木瓜蛋白酶或胃蛋白酶,但是这些方法需要严苛的降解条件或催化剂的存在,因此不仅耗时,而且产量降低,产物活性被部分破坏。
FabRICATOR ®是目前*一种能在Ig G内特定的单一位点进行切割的蛋白酶,切割后产生F(ab’)2 及 Fc片段。FabRICATOR ®是由人化脓性链球菌的IdeS酶重组改进而来,IdeS酶对Ig G有特异性,目前还未发现该酶有其他底物存在。改进后的FabRICATOR ®属于半胱氨酸蛋白酶,能快速准确切割Ig G生成F(ab’)2 及 Fc片段。这种切割反应可在生理条件下进行(在目前通用的缓冲体系pH 从6.0 到8.0均可胜任),因此zui大程度上保持了抗体活性。目前所有人类的IgG均被证实可被FabRICATOR®特异性切割,另外兔、绵羊及猴子的IgG也适用但是小鼠只有IgG3可被切割,而小鼠IgG2则需要提高FabRICATOR®浓度及延长切割时间
FabRICATOR ®相比传统抗体亚单位制备法的优势:
- 快速切割省时省力30 minutes
- 无需严苛的反应条件
- 产物单一明确(Fc 及(Fab\')2片段)
- 生理条件下反应确保产物活性
FabRICATOR ®相关产品
- FabRICATOR (IdeS):
快速在IgG 特意位点切割,得到Fc 及(Fab\')2片段。
二、FabULOUS (SpeB)
作为FabRICATOR家族的补充,FabULOUS可以在抗体较高位点进行切割,便于进一步分析抗体结构。
三、IgGZERO (Endo S) 与GlycINATOR(EndoS2)
特异性水解去除抗体Fc片段上的N型糖链,增强抗体特异性与敏感性。
四、FragIT 试剂盒
该试剂盒含有将FabRICATOR融合与琼脂糖微珠上,配备纯化柱便于快速地从0.5 mg to 100 mg抗体中制备与纯化Fc 及(Fab\')2。(Fab\')2可流经纯化柱获得,而被柱子吸附的Fc也可zui后从柱子中洗脱得到,从而得到分离的Fc 及(Fab\')2片段。(Fab\')2片段还可通过添加2-MEA (2巯基乙醇)进一步解离为Fab片段。
五、Anti-FabRICATOR抗体
来源于山羊的用于检测FabRICATOR 酶的Anti-FabRICATOR多克隆抗体,可用于FabRICATOR酶的Western blot与 ELISA 检测。
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相关参考文献:
Deglycosylation of mAb by EndoS for Improived Molecular Imaging:Peng Gao, Kenneth L. Pinkston, Nathaniel Wilganowski, Holly Robinson, Ali Azhdarinia, Banghe Zhu, Eva M. Sevick-Muraca, Barrett R. Harvey
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