实验方法原理因为哺乳动物细胞不具备低等真核生物细胞所具有的扩增 RNAi 信号的机制，因此人工合成或体外转录的 siRNA 分子在细胞内的作用是瞬时性的，不适合用于进行靶基因的表达受到抑制后细胞表型的长期变化观察，也不适于进行文库的筛选。此外，体外制备 siRNA 分子的成本比较高，而且 siRNA 分子在体外易被 RNase 降解，操作相对比较复杂，这就限制了他们的应用。新近，Brummelkamp、Miyagishi 等采用 RNA 聚合酶 Ⅲ 的启动子（U6 和 H1）在哺乳动物细胞中表达 siRNA 分子，成功地抑制了靶基因的表达，为在哺乳动物细胞中长期研究对特异性基因的抑制打下了基础。如果将 siRNA 分子表达盒（casseue) 插入腺病毒或反转录病毒载体中，就可以通过特异性地抑制机体中特定致病基因的表达来达到基因治疗的目的。实验材料siRNA表达载体DNA寡聚核苷酸限制性内切核酸酶T4 DNA连接酶U6 或 H1......阅读全文 吃什么就是什么？对，食物会影响你的DNA序列

牛津大学的研究人员在两种寄生虫中检测到了食物组分造成的DNA序列差异。他们在Genome Biology杂志上发表文章指出，食物能够影响生物的基因序列。 \"生物从食物中获取原料构建自己的DNA。我们认为，食物组分可能应该能够改变生物的DNA。我们也许可以预测素食者熊猫与肉食者北极熊之间的基因差

Cell子刊惊人发现：饮食会通过肠道菌影响表观基因组

UW-Madison研究团队十一月二十三日在Molecular Cell杂志上发表文章指出，饮食会影响肠道菌释放的代谢物。这些代谢物作用于宿主近端结肠、肝脏和脂肪组织的组蛋白，通过表观遗传学途径改变这些组织的基因转录。 研究人员首先对无菌小鼠和肠道菌活跃的小鼠进行比较。他们发现，肠道菌群能改变

Nat Rev Genetics | 环状RNA的合成与功能

环状RNA(circular RNA,circRNA)是一种新兴的内源性非编码RNA(noncoding RNA,ncRNA)，是继microRNA (miRNA)以及long noncoding RNA (IncRNA)后非编码RNA家族中极具研究潜力的新成员。越来越多的研究表明，环状RNA具

中山大学伦照荣教授PNAS发表新成果

来自中山大学、德克萨斯大学医学院和加州大学欧文分校等处的研究人员证实，两条不同的细胞分裂信号通路驱动了布氏锥虫细胞从相反的细胞端启动细胞分裂。这一成果发布在2月29日的《美国国家科学院院刊》（PNAS）上。 中山大学的伦照荣（Zhao-Rong Lun）教授、德克萨斯大学医学院的Ziyin L

科研中的\"新星”技术——MicroRNA荧光定量PCR

Micro RNA简介微小RNA(microRNA，简称miRNA)是生物体内源长度约为20－23个核苷酸的非编码单链小分子RNA，通过与靶mRNA的互补配对而在转录后水平上对基因的表达进行负调控，导致mRNA的降解或翻译抑制。是由具有发夹结构的约70-90个碱基大小的单链RNA前体经过Dicer酶

外泌体制备方法的优化新思路:外泌体释放受mTORC1调节

外泌体（Exosome）是由多种类型的细胞释放到细胞外的小型膜结合囊泡。 这些纳米大小的囊泡携带蛋白质，mRNA和miRNA，并参与了废物清理和细胞间通讯的过程。本研究发现，外泌体释放导致的细胞膜和蛋白质含量的损失，受到了雷帕霉素复合物1（mTORC1）负向调节。 在细胞和动物模型中的研究发

上海交大教授Cell Stem Cell新发现：干细胞表观-代谢新机制

生物通报道：我们的机体在不断地发生改变：新细胞不断替换特化细胞来维持皮肤、肠、血液和其他组织，或在损伤后修复它们。由于分化细胞通常无法分裂，更新几乎总是由组织特异性的干细胞来完成，它们能够不断地生成新细胞。但是这其中具体的机制至今科学家们并不是十分清楚。 近期来自中科院上海生科院，上海交通大学

戚益军教授Cell子刊发布小RNA研究新发现

来自中国医学科学院、清华大学的研究人员在新研究中证实，在拟南芥中cma33 / XCT通过调节Dicer-Like（DCL）基因的转录调控了小RNA(sRNA)的生成。这一研究发现发表在8月刊的《分子植物》（Molecular Plant）杂志上。 现任职于中国医学科学院及清华大学的戚益军（Y

染色质重塑因子PKL在RNA介导的DNA甲基化中的功能

5月31日，《基因组生物学》（Genome Biology）杂志在线发表了中国科学院上海生命科学研究院植物逆境生物学研究中心张蘅研究组题为The developmental regulator PKL is required to maintain correct DNA methylation

长链非编码RNA测序服务助力揭开lncRNA神秘面纱

2012年12月18日，华大基因科技服务有限公司(简称\"华大科技”)在国内推出长链非编码RNA测序(lncRNA-Seq)服务。该技术突破了常规研究方法效率低、研究范围受限的瓶颈，可一次性获得样本中几乎全部的lncRNA序列，不仅可以对已知lncRNA进行定量分析，还可对 novel lnc

微纳技术调控神经-肿瘤相互作用并治疗胰腺癌获进展

近日，中国科学院国家纳米科学中心研究员蒋兴宇、郑文富、博士雷祎凤和中国人民解放军总医院301医院肝胆外科教授姜凯、日本东北大学医学院教授Yoh Hamada等合作，在微流控芯片上构建神经-肿瘤研究模型，以金纳米簇为神经生长因子小干扰RNA (NGF siRNA)载体，在靶向胰腺的神经微环境、治疗

探究转录因子对于hESC代谢调控新机制研究

ESC在体外可无限自我更新和分化为机体内任何种类的细胞，在器官再生和细胞替代治疗中具有广阔的应用前景。然而，hESC维持自我更新及发育多能性的分子调控机制还有很多问题尚不清楚，妨碍了将其分化的细胞安全有效地应用于临床。因此，对人ESC如何维持其自身特性的机制进行深入的研究尤为重要。 研究思

探究转录因子对于hESC代谢调控新机制研究

ESC在体外可无限自我更新和分化为机体内任何种类的细胞，在器官再生和细胞替代治疗中具有广阔的应用前景。然而，hESC维持自我更新及发育多能性的分子调控机制还有很多问题尚不清楚，妨碍了将其分化的细胞安全有效地应用于临床。因此，对人ESC如何维持其自身特性的机制进行深入的研究尤为重要。 研究思

中国科大揭示小RNA表观修饰新机制

日前，中国科学技术大学教授光寿红课题组研究揭示小RNA介导组蛋白3 赖氨酸27 的三甲基修饰机制，研究成果发表在近期的Current Biology 上，中国科大生命科学学院博士生毛慧和朱成明为论文的共同第一作者。 小RNA介导染色体修饰在植物和酵母中有着广泛的研究，然而在动物中小RNA指导的

吴立刚课题组Nature子刊发布RNAi新工具

来自中科院上海生命科学研究院的研究人员报告称，他们设计出了一种替代性的小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）前体，将之命名为saiRNA (single-stranded, Argonaute 2 (Ago2)-processed interfering RNA)

RNAi实验原理与制备方法（二）

3.用RNase III 消化长片断双链RNA制备siRNA其他制备siRNA的方法的缺陷是需要设计和检验多个siRNA序列以便找到一个有效的siRNA。而用这种方法——制备一份混合有各种siRNAs \"混合鸡尾酒” 就可以避免这个缺陷。选择通常是200—1000碱基的靶mRNA模版，用体外转录

RNAi实验原理与方法（二）

3.用RNase III 消化长片断双链RNA制备siRNA其他制备siRNA的方法的缺陷是需要设计和检验多个siRNA序列以便找到一个有效的siRNA。而用这种方法——制备一份混合有各种siRNAs \"混合鸡尾酒” 就可以避免这个缺陷。选择通常是200—1000碱基的靶mRNA模版，用体外转录

RNAi的实验原理和操作实用技术(2)

2.体外转录以DNA Oligo为模版，通过体外转录合成siRNAs，成本相对化学合成法而言比较低，而且能够比化学合成法更快的得到siRNAs。不足之处是实验的规模受到限制，虽然一次体外转录合成能提供足够做数百次转染的siRNAs，但是反应规模和量始终有一定的限制。而且和化学合成相比，还是需要占

RNA干扰（RNAi）实验原理与方法（2）

dsRNA消化法的主要优点在于可以跳过检测和筛选有效siRNA序列的步骤，为研究人员节省时间和金钱（注意：通常用RNAse III通常比用Dicer要便宜）。不过这种方法的缺点也很明显，就是有可能引发非特异的基因沉默，特别是同源或者是密切相关的基因。现在多数的研究显示这种情况通常不会造成影响。最

携带siRNA纳米颗粒抑制三阴性乳腺癌转移

来自美国的华人科学家Zheng-Rong Lu在国际学术期刊cancer research发表了一篇文章，他们针对β3整合素设计了siRNA并通过纳米颗粒进行体内转运能够显著抑制三阴性乳腺癌的生长，转移和复发，具有重要应用前景。 转移性乳腺癌是癌症导致女性死亡的第二大杀手，而三阴性乳腺癌是乳腺

RNA干扰的详细实验步骤

步骤包括:(一)siRNA的设计1. 在设计RNAi实验时，可以先在以下网站进行目标序列的筛选：GenesilAmbion2. RNAi目标序列的选取原则：(1)从转录本（mRNA）的AUG起始密码开始，寻找\"AA”二连序列，并记下其3 端的19个碱基序列，作为潜在的siRNA靶位点。有研究

siRNA制备方法

体外制备1.化学合成许多国外公司都可以根据用户要求提供高质量的化学合成siRNA。主要的缺点包括价格高，定制周期长，特别是有特殊需求的。由于价格比其他方法高，为一个基因合成3―4对siRNAs 的成本就更高了，比较常见的做法是用其他方法筛选出最有效的序列再进行化学合成。最适用于：已经找到最有效的si

siRNA的制备方法介绍

体外制备1.化学合成许多国外公司都可以根据用户要求提供高质量的化学合成siRNA。主要的缺点包括价格高，定制周期长，特别是有特殊需求的。由于价格比其他方法高，为一个基因合成3—4对siRNAs 的成本就更高了，比较常见的做法是用其他方法筛选出最有效的序列再进行化学合成。最适用于：已经找到最有效的si

RNA干扰实验技术介绍（二）

dsRNA消化法的主要优点在于可以跳过检测和筛选有效siRNA序列的步骤，为研究人员节省时间和金钱（注意：通常用RNAse III通常比用Dicer要便宜）。不过这种方法的缺点也很明显，就是有可能引发非特异的基因沉默，特别是同源或者是密切相关的基因。现在多数的研究显示 这种情况通常不会造成影

环状RNA结合功能蛋白！找对方向20分文章水到渠成

环状RNA作为研究持续火热的明星分子，不同于对其丰富的表达谱研究，环状RNA功能机制研究还仅仅处在起步阶段。环状RNA研究多为miRNA海绵机制，部分circRNA可竞争性结合miRNA，解除miRNA对靶基因的抑制作用，上调靶基因的表达。其实，环状RNA可以通过结合不同种类的功能蛋白，分别在转

m6A\"RNA甲基化”研究汇总—病毒篇

RNA甲基化领域是当前最耀眼的国际科研明星，也是国自然申请的大热点；究其原因，是因为最近一两年，RNA甲基化的功能与分子机制方面取得了巨大的进展。RNA甲基化已被证实在癌症发生发展，病毒感染，神经发育，干细胞分化等过程中发挥着关键作用。今天，我们承接上一期的癌症篇，为您带来病毒领域的RNA甲基化研究

云序生物最新m6A\"RNA甲基化”研究汇总—病毒篇

RNA甲基化领域是当前最耀眼的国际科研明星，也是国自然申请的大热点；究其原因，是因为最近一两年，RNA甲基化的功能与分子机制方面取得了巨大的进展。RNA甲基化已被证实在癌症发生发展，病毒感染，神经发育，干细胞分化等过程中发挥着关键作用。今天，我们承接上一期的癌症篇，为您带来病毒领域的RNA甲基化

siRNA制备方法介绍

体外制备1.化学合成许多国外公司都可以根据用户要求提供高质量的化学合成siRNA。主要的缺点包括价格高，定制周期长，特别是有特殊需求的。由于价格比其他方法高，为一个基因合成3―4对siRNAs 的成本就更高了，比较常见的做法是用其他方法筛选出最有效的序列再进行化学合成。最适用于：已经找到最有效的si

复旦大学，中科院Cancer Res发现癌症转移的新机制

生物通报道：来自中科院生物化学与细胞生物学研究所，复旦大学中山医院等处的研究人员发表了题为\"KRAS-NFκB-YY1-miR-489 signaling axis controls pancreatic cancer metastasis”的文章，发现KRAS通过激活NF-κB炎症信号通路激活