下载所得到的文件列表Xonamicrofluidicsllc神经元突触轴突连接微流体培养板.docx文档介绍：Xona Microfluidics LLC美国公司神经元突触轴突培养舱Microfluidic Chamber,突触虽然是神经系统重要的功能单位,但针对突触的通用研究方法仍具有一定局限性,有待完善改进,为加深对突触发生、病变现象及机制的研究,MICOFORCE米力光CO本实验设计建立创新性研究方法,实现体外动态观察神经元突触结构的变化。 【设计思路】 本实验引入新型培养装置Microfluidic Chamber和跨突触结构重组GFP荧光蛋白对mGRASP实现神经元突触体外动态观察。Microfluidic Chamber有双侧培养空间,由微通道相通,仅能允许神经元轴突通过,同时根据流体动力学原理其双侧液体不会发生混合。mGRASP全称为mammalian GFP reconstitution across synaptic partners,包括Pre和Post两个蛋白,分别携带GFP蛋白的一部分,当二者距离约为20 nm左右时,能重组成GFP发出绿色荧光,反之则无荧光信号。Pre和Post通过neurexin和neuroligin固定表达在突触前膜和突触后膜上,利用突触间隙约为20 nm且小于正常细胞间距的原理,用绿色荧光特异性标记突触,体外动态观察突触结构。 【实验内容】 本实验在新型培养装置Microfluidic Chamber进行孕17天小鼠胎鼠皮层神经元原代培养,体外培养6~7 d,在两侧分别加入携带mGRASP Pre和Post基因的慢病毒感染神经元,基于Microfluidic Chamber良好的液相分隔性,能做到两侧分别表达Pre和Post蛋白,而不会出现二者同一细胞中共表达的情况。培养4周左右,表达Pre的神经元轴突穿过微通道与另一侧表达Post的神经元接触,形成突触后即可在突触间隙发出绿色荧光。可在培养基中加入神经营养因子或药物,体外动态观察生理、病理刺激对突触结构的影响。 【材料】 实验动物为孕17 dICR小鼠;Microfluidic Chamber购自Xona Microfluidics公司,货号为RD450;mGRASP基因由Dr. Jinhyun Kim惠赠。 【可行性】 在Microfluidic Chamber中进行神经元原代培养为已掌握技术;mGRASP蛋白已在细胞中表达,能检测到绿色荧光,证明实验可行。 【创新性】 由于突触结构的特性和通用标记方法大多具有细胞毒性,目前尚无较好办法实现神经元突触的体外动态观察,mGRASP作为荧光蛋白无明显细胞毒性,表达后仍可进行长期观察。mGRASP的应用必须基于Pre和Post独立表达,一旦在同一细胞中共表达即可发出绿色荧光,失去特异性标记突触的作用,因此mGRASP多通过定位注射的方式应用于在体实验,本实验设计创新性的利用Microfluidic Chamber良好的液相分隔性,实现了mGRASP的体外应用,进而动态观察突触结构。xona Microfluidics snd150 神经元突触细胞微灌流系统xona microfluidics snd450 神经元突触细胞微灌流系统xona microfluidics snd900 神经元突触细胞微灌流系统xona microfluidics TCND500 神经元突触细胞微灌流系统xona microfluidics TCND1000 神经元突触细胞微灌流系统xona microfluidics RD150 神经元突触细胞微灌流系统xona microfluidics RD450 神经元突触细胞微灌流系统xona microfluidics RD900 神经元突触细胞微灌流系统xona microfluidics ULP 神经元突触细胞微灌流系Nat Methods. 2005 Aug;2(8):599-605.A microfluidic culture platform S axonal injury, regeneration and transport.Taylor AM, Blurton-Jones M, Rhee SW, Cribbs DH, Cotman CW, Jeon NL. enlarge imageInvestigation of axonal biology in the central nervous system (CNS) is hindered by a lack of an appropriate in vitro method to probe axons independently from cell bodies. Here we describe a microfluidic culture platform that polarizes the growth S axons into a fluidically isolated environment without the use of targeting neurotrophins. Complete ReferenceAdditional ReferencesJ Neurosci Methods. 2013 Sep 15;218(2):164-9. doi: 10.1016/j.jneumeth.2013.06.002. Epub 2013 Jun 14.Microfluidic primary culture model of the lower motor neuron-neuromuscular junction circuit.Southam KA, King AE, Blizzard CA, McCormack GH, Dickson TC.Menzies Research Institute Tasmania, University of Tasmania, Hobart, Tasmania 7000, Australia.J Neurosci. 2013 May 15;33(20):8898-908. doi: 10.1523/JNEUROSCI.0289-13.2013.Dendritic GluN2A synthesis mediates activity-induced NMDA receptor insertion.Swanger SA, He YA, Richter JD, Bassell GJ.Department of Cell Biology, Emory University School of Medicine, Atlanta, ia 30322, USA.Development. 2013 May;140(10):2108-17. doi: 10.1242/dev.085266.ProNGF promotes neurite growth from a内容来自蚂蚁淘网www.taodocs.com转载请标明出处.