随机引物法DNA探针标记试剂盒(生物素)
生物素与亲和素的结合只需要生物素的脲基环部分。因此可将其戊酸侧链通过酰胺键与核酸分子相连,构成生物素标记的核酸标记探针,与固定在滤膜上或固定在组织细胞或染色体原位的核酸分子的同源序列互补杂交。KPL的PCR探针标记生物素试剂盒(Detector™ PCR DNA Biotinylation Kit)通过PCR反应,使用随机掺入生物素标记的biotin-N4-dCTP分子嵌入DNA分子探针中,制备成用于核酸杂交的DNA标记探针。
PCR探针标记生物素试剂盒(Detector™ PCR DNA Biotinylation Kit)制备的生物素标记探针具有很高的敏感性,能检测低拷贝的序列。该探针标记试剂盒由于使用了PCR方法,与随机引物探针标记试剂盒相比,能实现特异标记,并能扩增任何感兴趣的序列甚至包括DNA粗样,其适用性更大。试剂盒内的biotin-N4-dCTP与未标记的dCTP比率被优化,能够最大的掺入生物素,并能检测低拷贝或微量的mRNA、质粒、基因组DNA等。
PCR探针标记生物素试剂盒内包括预标记的标准样(用于检测在标记反应中DNA的合成量)。该探针标记方案的最优DNA模板大小为100-1100bp大小。所需模板量分别为基因组DNA(1-100 ng)、质粒(10pg-1ng)。在进行PCR探针标记之前,需要提前进行PCR的预试验。同时试剂盒内还提供对照引物和模板DNA,以检测PCR反应的完整性。采用该试剂盒进行探针的生物素标记,最快1小时内即能完成,制备好的标记探针能保存1年以上。
经PCR探针标记生物素试剂盒制备的探针可以用以下方法检测:制备后的生物素化探针电泳并被转移到膜上,然后使用无探针的酶标链霉亲和素,加入底物后显色发光。制备的标记探针可应用于Southern杂交、Northern杂交, 克隆或成斑杂交、点杂交及原位杂交等。
技术文章:
生物素标记试剂和试剂盒选择指南
DNA 探针的发展
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