芯片类检测：全基因组表达谱芯片技术服务
| 提供商： | 嘉美实验 |
| 服务名称： | 芯片类检测：全基因组表达谱芯片技术服务 |
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实验技术简介：全基因组基因表达谱的检测对疾病研究有非常重要的意义。一方面，基因表达谱的检测可以应用于疾病生物标记物的筛选。另一方面，基因表达谱的检测可以为基因功能研究提供线索，有助于揭示疾病发生发展的分子机制。
实验操作流程：1. 样品RNA抽提：2. RNA质量检测： a. 使用Nanodrop测定RNA 在分光光度计260nm、280nm和230nm的吸收值，以计算浓度并评估纯度 b. 用甲醛电泳试剂进行变性琼脂糖凝胶电泳，检测RNA纯度及完整性 c. 提供RNA QC报告 注意：用于芯片检测的RNA样品，必须是高质量的，完整的，没有RNase污染（降解的样品不能用于标记和芯片检测），没有基因组污染。3. cDNA/aRNA样品合成和标记4. 标记效率质量检测： 使用Nanodrop检测荧光标记效率，标记效率合格以保证后续芯片实验结果的可靠性5. 芯片杂交： 在标准条件下将标记好的探针和高密度基因组芯片进行杂交6. 图像采集和数据分析： 使用GenePix 4000B芯片扫描仪扫描芯片的荧光强度，并将实验结果转换成数字型数据保存，使用配套软件对原始数据进行分析运算7.提供实验报告 包括详细的实验方法以及芯片实验数据和图表 差异基因筛选、聚类分析、GO分析、Pathway分析、趋势分析（STEM-Analysis）、基因间相互作用网络分析、联合分析
实验注意事项：客户提供：生物样品(组织、细胞或血清、血浆、细胞培养上清、体液、细胞裂解液、组织裂解液)；若客户直接提供组织或细胞，我们需要提取总蛋白并定量。交付标准：杂交图片、数据结果及相应聚类和差异分析等结果其他：新鲜组织样品的保存与运输（每张芯片需50-100mg组织）1、使用RNAlater试剂：取新鲜组织（注：生物体死亡后尽快在10分钟内取材），组织块以PBS或生理盐水清洗干净，所用组织必须切至厚度在0.5 cm以下（长宽不限），然后放入装有5倍体积RNAlater的离心管（或冻存管）中。4℃孵育过夜，此时样品管需要横置以便组织块充分接触到RNAlater，然后转入- 20℃中保存。样品在- 20℃不会冻结，但是溶液中可能有一些晶体出现，这并不影响后续的RNA抽提。冻存样品也可以反复冻溶，其RNA含量和完整性不受影响。2、RNAlater处理的标本可用常规冰袋4℃低温运输（无需使用干冰- 70℃运输）。3、 B、使用Trizol试剂：Trizol试剂可抑制RNA酶活性，破坏细胞膜结构以裂解细胞释放出RNA。 取新鲜组织（注：生物体死亡后1分钟内取材料并保存好），组织块以PBS或生理盐水清洗干净，每50~100 mg组织加1 ml Trizol溶液匀浆裂解组织样品，操作最好在冰上进行。4、匀浆的裂解液4℃短期保存（1个月），-20度或- 70℃长期保存。干冰运输，短期（5天以内）冷藏（4℃）运输亦可。5、冻存组织的保存与运输生 物体死亡后尽快（最好在10分钟内）切取新鲜组织，以PBS或生理盐水清洗干净切为小块，立刻放入液氮中冷冻2-3小时后可转入-80℃冰箱保存或着一 直保存在液氮中。冻存组织可放入干冰中直接运输，或者以Trizol4℃下匀浆： 冻存的组织块以液氮研磨后加Trizol或直接加Trizol以电动匀浆器匀浆，匀浆的裂解液干冰运输或短期（5天以内）冷藏（4℃）运输。哺乳动物培养细胞样品采集、保存与运输——使用Trizol试剂（不建议使用RNAlater）6、悬浮细胞：悬浮细胞培养液倒入离心管中，离心沉淀细胞，弃去上清液。7、细胞沉淀（1×107个细胞）中加入1 ml的Trizol裂解液。反复吸打几次后，目视可见细胞层溶解完全。- 70℃保存或干冰运输。注：Trizol处理的标本冷藏（4℃）运输，短期（5天以内）亦可。8、 贴壁细胞：从培养容器中吸出并弃去培养液。培养瓶中直接加入Trizol试剂，Trizol用量与细胞贴壁面积有关，约15 cm2细胞贴壁面积加入1 ml Trizol。反复吸打几次后，目视可见细胞层溶解完全。- 70℃保存或干冰运输。注：Trizol处理的标本冷藏（4℃）运输，短期（5天以内）亦可。Tel：010-57425721/57425722 Fax：010-80780672 E-mail：lab-manager@jiamay.comWeb：www.jiamay.com.cn www.jiamay.com400免费热线：400-0007-401Add：北京市朝阳区北苑路旭辉·奥都7#楼2404室 P.C.：100012(未经允许，禁止转载)
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